2.4.2 TUNEL法检测细胞凋亡

    4%PFA和4%蔗糖在PBS中固定细胞30 min，PBS洗涤后，加入0.1%Triton X-100和0.1%柠檬酸钠的PBS冰育2 min。用PBS洗涤2次后加适量TUNEL检测液，37 ℃避光孵育60 min，PBS洗涤后加适量DAPI，37 ℃避光孵育60 min，PBS洗涤3次。用抗荧光淬灭封片液封片后荧光显微镜下观察。TUNEL染色细胞凋亡的细胞核为绿色荧光，DAPI染色细胞核为蓝色荧光。细胞凋亡百分率通过计算比值来确定。TUNEL阳性细胞数在1个计数中共100个细胞。取5個计数的平均值为神经元细胞死亡的百分比。

    2.4.3 Western blot检测蛋白表达

    各组按实验设计给药后继续孵育细胞24 h，洗涤后裂解细胞，冰上反应30 min，离心，取上清液。BCA法测定各组蛋自浓度，将每个样品蛋白浓度调成一致，10%SDS-PAGE分离蛋自质，PVDF转膜后奶粉封闭30 min，一抗(1∶1000)孵育过夜(4 ℃) ......