基于GSN稳转肝癌细胞的转录组新基因研究(2)
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1.6统计学分析 实验数据采用SPSS 19.0统计学软件进行非参数检验Mann-Whitney Test分析，P<0.05认为差异有统计学意义。
2结果
2.1 GSN全长FLAG-HA双标签重组质粒的构建及鉴定 PCDH-CMV-MCS- EFl-Puro慢病毒载体经改装后，接入GSN全长片段构建成FLAG-HA-GSN重组质粒，测序鉴定质粒的核苷酸序列与预期符合，见图1，成功构建了GSN真核表达载体。
2.2 GSN稳定表达肝癌细胞株的ICW鉴定 Odyssey红外荧光扫描系统扫描GSN蛋白信号并定量，获得表达灰度值后，采用非参数检验Mann-Whitney Test分析结果，稳定转染细胞中GSN蛋白的表达为未处理细胞的2.02倍，两组的表达差异具有统计学意义(P<0.05)，见图2。
2.3转录组测序检测mRNA水平的表达 测序结果以FPKM法计算基因表达量，样本间mRNA测序数据结果的差异比较，用读段的绝对表达值倍数变化(fold change)分析。测序数据分析表明GSN过表达载体转染细胞后，与未转染肝癌细胞相比，转录组测序结果发现差异表达新基因共21个，其中上调表达基因12个，下调表达基因9个，6个基因上调和4个基因下调的绝对表达值倍数变化均>4，见表1。
3讨论
随着功能基因研究的深入，细胞转染已成为常见的基本实验技术之一，而慢病毒转染凭其转染率高、转染稳定等优点，被广泛应用于细胞转染实验[4]。本研究通过对PCDH-CMV-MCS-EFl-Puro慢病毒载体的改造，在载体中接入FLAG-HA标签，构建成GSN双标签重组质粒 ......
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