PCR-RLFP方法检测IL-6基因启动子区-634C/G多态性实验条件研究(1)
PCR-RLFP方法检测IL-6基因启动子区-634C,G多态性实验条件研究,白细胞介素-6基因,聚合酶链反应-限制性片段长度多态性,试验条件糖尿病视网膜病变(diabetic,retino
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摘要：目的探讨PCR-RFLP技术判断IL-6基因启动子区-634C/G多态性的最适实验条件。方法对影响PCR的部分因素和影响RFLP方法的一些因素进行研究。结果PCR扩增IL-6基因启动子区的最适条件为：引物浓度为30umol/L；Taq酶量为5U； dNTP浓度为56μmol/L。最经济有效的酶切体系为20μl体系中加4μl产物用5U的酶消化9h。结论最佳的实验条件的探索是进行大批量实验研究的关键。
关键词：白细胞介素-6基因；多态性；聚合酶链反应-限制性片段长度多态性；试验条件糖尿病视网膜病变(diabetic retinopathy,DR)是糖尿病(diabetes mellitus,DM)患者一种常见的严重的致盲眼病。DR也是DM常见且难治的并发症之一,在欧美各国四大致盲眼病中占第一或第二位, 在我国也是主要致盲病之一,约10%DM患者在起病后5～9年便可发生DR,15 年后约50 %的人发生DR,25 年后80 %～90 %的人发生DR[1]。DR的发病机制是环境和遗传因素共同作用的。长期的高血糖是最重要的原因，然而，DR的发生发展不同的个体差异很大，这也说明遗传可能起一定作用。近年来提出T2DM是一种亚临床炎症性疾病,作为炎症反应的核心细胞因子IL-6，张洁等[2]研究发现随着糖尿病视网膜病变程度的加重，泪液IL-6含量逐渐升高，提示泪液IL- 6水平与糖尿病视网膜病变的发生有关。体外培养视网膜Muller细胞显示：糖化蛋白终末产物可引起视网膜Muller细胞产生IL-6，并且存在剂量依赖关系，IL-6的增加与DR的发生密切相关[3]。我们就此多态性进行检测，旨在探讨L-6基因启动子区-634C/G多态性与中国广东地区汉族人DR是否存在关联。限制性内切酶是分子生物学中研究基因变异的一把手术刀，可以特异性切割所识别的碱基序列，利用这个特点，可以用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)方法检测基因片段中某一位点是否存在变异 ......
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