迷走神经对大鼠肝细胞中NTCP表达作用的研究
RT-PCR,Western,blotting支配肝脏的神经分布广泛,肝实质细胞如肝细胞和非实质细
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摘要：目的本实验拟通过建立去迷走神经肝支大鼠模型，探讨迷走神经对肝细胞功能、状态及NTCP的表达变化的影响。方法大鼠随机分为两组：A组：迷走神经肝支切断组， B组：假手术组，每组20只。通过HE染色法光学显微镜下观察切断迷走神经肝支后的肝脏病理形态学改变，分别通过RT-PCR及Western blotting法检测NTCP的表达变化，来分析迷走神经对其影响。结果去迷走神经组中，肝脏组织NTCP mRNA和NTCP基因表达均随着术后时间其表达明显下降。结论在去迷走神经肝支状态下，肝细胞发生改变，NTCP表达水平减少，进而影响胆盐因子转运及表达。
关键词：NTCP ；迷走神经；RT-PCR；Western blotting支配肝脏的神经分布广泛，肝实质细胞如肝细胞和非实质细胞如Kupffer细胞、肝窦内皮细胞等都被交感神经和副交感神经双重支配着[1]。国内外的研究表明，支配肝脏的神经在调节肝脏血流的改变，物质代谢以及胆道系统的功能方面均有重要作用。Na+牛磺胆酸盐同向转运多肽(NTCP)是肝细胞特有的一种转运载体，在肝小叶和肝的腺泡均有广泛分布，胆汁酸盐4/5的结合型牛磺胆酸被钠离子依赖性途径所吸收，最终形成了胆盐依赖性胆汁流，被称为重要的胆盐摄取系统[2]。
1实验方法
1.1实验动物与分组 健康Wistar大鼠40只，雌性，清洁级动物，体重200~220 g(佳木斯大学动物实验中心提供)。大鼠饲养于恒温清洁环境，喂饲标准饲料，维持12 h昼夜节律。随机分为以下二组：A组：迷走神经肝支切断组，B组：假手术组，每组20只。A组距离贲门0.5 cm分出的迷走神经肝支并离断；假手术组大鼠开腹后探查迷走神经(见照片1)。各组分别在手术后第1，3，5，7，9 d剪取肝组织。分别进行HE染色，观察肝脏病理形态学的变化。
1.2通过逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法检测NTCP mRNA 的表达变化 用Trizol液提取组织mRNA，分光光度法测定RNA的纯度，采用RT-PCR技术，以β-actin为内参，引物序列sense 5'-GTGCCATTAGCCAAGGGAATTCA
GC-3',Antisense 5'-GCGTTCCTGTTCCACTCATAGGAGG-3'扩增产物片断大小为121bp；β-actinsense5'-TGAAGGTCGGAGTCAACGGATTTGGT-3',Antisense 5'-CATGTGGGCCATGAGGTCCACCAC-3?扩增产物片断大小为241 bp ......
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