20例盆底器官脱垂患者骶韧带组织结构变化的病例对照研究(2)
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1.2标本收集、制作、结果判定 行子宫全切时，术中冷刀留取近宫颈1cm处双侧骶韧带，组织块约5 mm×5 mm×5 mm，一块采用10%中性甲醛溶液固定，两组共计20块组织用于石蜡切片。病理组织切片染色结果判定，由1名病理科医师采用盲法独立阅片完成。
1.3常规组织形态学观察 组织连续切片(厚度5μm)，常规脱蜡、水化、苏木精和伊红(HE)染色、脱水、封片后，在40倍、100倍、400倍光学显微镜下进行观察，随机各取5个视野，经NikonDS-Ri1数码显微摄像后输入计算机。
1.4免疫组织化学 主要试剂及耗材：二氨基联苯胺(DAB)显色试剂盒、特异性抗体：抗Desmin、抗Actin、抗Vimentin、抗ki67单克隆抗体、鼠ABC试剂盒均购自北京中杉金桥生物技术有限公司。石蜡切片Vimentin、Actin、Desmin、Ki67免疫组化染色对非血管平滑肌细胞、成纤维细胞分布的图像分析：所有平滑肌细胞Actin免疫组化染色呈现阳性反应，细胞浆呈棕褐色颗粒沉着；血管平滑肌细胞Desmin多数呈阴性反应，细胞蓝染；成纤维细胞Desmin、Actin免疫组化染色呈现阴性反应，细胞蓝染；平滑肌细胞、成纤维细胞Vimentin均呈现阳性反应，细胞浆呈棕褐色颗粒沉着。通过非血管及血管平滑肌细胞、成纤维细胞上述免疫组化染色特性，可以在分别用Vimentin、Actin、Desmin染色的连续三张切片上的同一视野，区分它们。然后，在100倍光镜下随机取5个视野，经Nikon数码显微摄像后输入计算机。结果分析前将血管及其相关平滑肌通过手工描记并排除，用Image Pro Plus 5 ......
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