p16和CD44v6在胃癌中的表达及其临床意义(1)
摘要：目的 探讨p16和CD44v6在胃癌中的表达规律及其临床意义。方法 应用免疫组织化学SP方法，对93例胃癌中p16和CD44v6的表达进行了观察。结果 胃癌组织中p16和CD44v6蛋白的总阳性率分别是39.78%(37/93)和41.94% (39/93)(P<0.05，P<0.05)。p16的表达与胃癌的分化程度和预后呈正相关，与胃癌TNM分期、浸润、淋巴结转移呈负相关(P<0.05)。CD44v6的表达与胃癌的TNM分期、浸润、淋巴结转移呈正相关，与预后呈负相关(P<0.05)。p16和CD44v6的表达呈负相关(r=-0.476，P=0.007)。结论 p16和CD44v6参与了胃癌的进展过程，并与胃癌的生物行为相关，是胃癌的诊断和判断预后的重要分子生物学检测指标。
关键词：p16；CD44v6；胃癌
胃癌预后的改善和治疗效果的提高，有赖于对胃癌发病机制逐步深入的认识。从蛋白质分子水平揭示其发生、发展的机制是当前研究的热点。研究表明，细胞癌变是由于细胞内某些基因的结构及功能发生改变而引起。在人类多种恶性肿瘤中发现p16和CD44v6基因的异常改变和异常表达.并与恶性肿瘤的临床指标和预后有关，p16基因是近年发现的新的抑癌基因。胃癌组织中pl6蛋白的表达情况，目前国内外少有报道。细胞跨膜粘附分子CD44v6在人类不同类型肿瘤的表达，可能成为肿瘤抗体导向治疗的基础。我们采用免疫组化技术，对93例胃癌的p16和CD44v6的表达进行研究，探讨其同胃癌的发生、发展及淋巴结转移的关系。
1资料与方法
1.1一般资料 93例胃癌标本为本院和外院2008年1月～2011年12月胃癌手术标本，男60例，女33例。平均年龄56.8岁。早期胃癌l1例，进展期胃癌82例，其中淋巴结转移阳性65例，淋巴结转移阴性28例。Lauren分型示肠型胃癌61例，弥漫型胃癌32例。实验采用存档蜡块。另取该组胃腺癌病例中肿瘤手术切除标本切缘处正常胃粘膜(病理证实)石蜡包埋标本15例及癌旁粘膜15例作为对照。胃癌的TNM分期按照2010年国际抗癌联盟/美国癌症联合委员会(UICC/AJCC)胃癌 TNM分期 标准进行。
1.2组织学检测采用常规苏木素-伊红染色。
1.3免疫组化检测 一抗分别为鼠抗人pl6单克隆抗体(稀释浓度1：100)、鼠抗人CD44v6单克隆抗体(稀释浓度1：100)及SP超敏即用型试剂盒等均由福州迈新生物技术开发公司提供。组织经10 %中性福尔马林固定，石蜡包埋，切片厚度4 um，连续切片分别做常规HE和免疫组织化学SP染色，免疫组织化主要操作步骤：严格按试剂盒说明书进行。阴性对照用PBS代替一抗，用已知的阳性组织切片作阳性对照。
1.4实验结果判定 pl6蛋白阳性着色主要定位于胞浆，部分胞核呈阳性染色，胞浆呈棕黄色或呈明显棕黄色颗粒；CD44v6蛋白蛋白主要以细胞浆出现棕黄色染色为阳性，可同时伴或不伴有胞浆弥漫性着色。镜下观察10个高倍镜视野(10×40)，并根据阳性细胞占视野中癌细胞总数的比例分为(-)：细胞内无棕黄色着色，或与切片背景染色一致者；(+)：阳性细胞<25 %；(+ +)：阳性细胞为25 %-50% ；(+++)：阳性细胞>50 %。
1.5统计学处理 应用SPSS17.0版本统计学软件对结果进行分析。两样本均数比较行t检验，计数资料比较用χ2检验，以P≤0.05为差异有统计学意义。
2结果
2.1胃癌按细胞分化程度分为高分化腺癌6例，中分化22例，低(未)分化65例。
2.2免疫组化结果 p16蛋白着色于癌细胞核及胞浆，CD44v6 着色于癌细胞膜。不同组织类型和分化程度的胃癌其分布方式无明显差异。93例胃癌中，p16蛋白阳性37例(39.78%)，CD44v6阳性39例(41.94%)。与对照组比较，均有显著性差异(P<0.05，P<0.05)。见表1。在胃癌的阳性表达与患者性别、年龄、组织分化程度、TNM分期及淋巴结转移情况的关系见表2。p16蛋白在淋巴结转移阳性组的表达率30.8%，显著低于淋巴结转移阴性组的表达率60.7%(P<0.01)。CD44v6在进展期胃癌、淋巴结转移阳性组的阳性表达率43.8%、52.3%，显著高于早期胃癌、淋巴结转移阴性组的阳性表达率9.1%、17.9%(P<0.05，P<0.01)。
2.3 CD44v6与p16的表达与患者预后的关系 p16、CD44v6的表达均与患者的预后有关，P16阳性表达者生存期≥3年及5年者分别为30.8% 、18.92%，而阴性者分别为25% 、10.71% 。CD44v6阳性表达者≥3年及5年的生存率分别为20.51%、10.26% ，而阴性者则分别是44.44% 、22.22%，见表3。但用Cox比例风险模型分析，只有P16是独立的预后因子，见表4。
2.4 CD44v6与P16表达的关系 在CD44v6呈阳性表达的37例胃癌中，P16呈阳性表达的有9例，CD44v6呈阴性表达的54例中P16呈阳性表达的有28例，经统计分析，二者在胃癌组织中表达的关系(r =-0.476，P= 0.007)，说明在胃癌组织中，CD44v6的表达随着P16表达的减弱而增强，二者之间存在负相关的关系，见表5。
3 讨论
细胞之间或细胞与细胞外基质之间黏附特性的异常，是肿瘤细胞区别于正常细胞的一个重要生物学特征。这种黏附特性的异常赋予肿瘤细胞从原发部位脱落并向邻近正常组织浸润的能力，而肿瘤侵袭能力的大小是肿瘤恶性程度高低的标志之一。CD44基因于1980年由Dalchau等采用单克隆技术检测并确定的。CD44分子是细胞表面的黏附分子之一，根据基因外显子表达方式的不同编码生物学特性不同的两种蛋白：标准型(CD44s)和变异型(CD44v)。CD44s的生理功能主要是参与细胞与细胞、细胞与间质之间的粘连；介导淋巴细胞的归巢及细胞的迁移。CD44v则主要出现在机体的病理过程，特别是肿瘤的发生、发展过程中[1]。CD44v的出现改变了肿瘤细胞表面黏附分子的构成和功能，使肿瘤细胞侵袭与转移能力增强。CD44v6是CD44的一种拼接异构体，其表达可改变肿瘤细胞表面黏附分子的构成和功能，有助于肿瘤细胞获得转移潜能。CD44v6的促进转移作用机制可能是表达CD44v6的肿瘤细胞与远隔的淋巴管和血管内某一配体结合，使转移至那里的肿瘤细胞更加稳定地寄宿与生长，有效形成转移瘤。近年来通过免疫组化和原位杂交技术研究发现，CD44v6的过量表达与多种人体恶性肿瘤，如乳腺癌、胃癌、食管癌、宫颈癌等许多肿瘤的发生、发展、侵袭及转移密切相关 ，认为CD44v6可作为独立的预后指标[1，2]。较多研究资料显示：CD44v6阳性表达的肿瘤较阴性表达者恶性程度高，发展快，淋巴结转移率高，术后易复发，生存期短，预后差。本实验结果显示：CD44v6在胃癌中的阳性表达率为54% ；在胃癌侵及黏膜及黏膜下层时，即胃癌的早期，就有CD44v6的阳性表达，且其阳性表达率随胃癌的浸润深度的加深而升高，这说明CD44v6的异常表达开始于胃癌的早期，且贯穿于胃癌的整个浸润过程；其阳性表达率与淋巴转移呈正相关，提示CD44v6的阳性表达参与了转移过程。阳性者3年生存率明显低于阴性者，提示该基因的异常表达有可能成为一个较好估计预后的指标。对于CD44v6的阳性表达者，应于术后严格进行化疗，预防胃癌的复发与转移。, 百拇医药(杨胜 熊兵红 马利 程勇 张才全)
关键词：p16；CD44v6；胃癌
胃癌预后的改善和治疗效果的提高，有赖于对胃癌发病机制逐步深入的认识。从蛋白质分子水平揭示其发生、发展的机制是当前研究的热点。研究表明，细胞癌变是由于细胞内某些基因的结构及功能发生改变而引起。在人类多种恶性肿瘤中发现p16和CD44v6基因的异常改变和异常表达.并与恶性肿瘤的临床指标和预后有关，p16基因是近年发现的新的抑癌基因。胃癌组织中pl6蛋白的表达情况，目前国内外少有报道。细胞跨膜粘附分子CD44v6在人类不同类型肿瘤的表达，可能成为肿瘤抗体导向治疗的基础。我们采用免疫组化技术，对93例胃癌的p16和CD44v6的表达进行研究，探讨其同胃癌的发生、发展及淋巴结转移的关系。
1资料与方法
1.1一般资料 93例胃癌标本为本院和外院2008年1月～2011年12月胃癌手术标本，男60例，女33例。平均年龄56.8岁。早期胃癌l1例，进展期胃癌82例，其中淋巴结转移阳性65例，淋巴结转移阴性28例。Lauren分型示肠型胃癌61例，弥漫型胃癌32例。实验采用存档蜡块。另取该组胃腺癌病例中肿瘤手术切除标本切缘处正常胃粘膜(病理证实)石蜡包埋标本15例及癌旁粘膜15例作为对照。胃癌的TNM分期按照2010年国际抗癌联盟/美国癌症联合委员会(UICC/AJCC)胃癌 TNM分期 标准进行。
1.2组织学检测采用常规苏木素-伊红染色。
1.3免疫组化检测 一抗分别为鼠抗人pl6单克隆抗体(稀释浓度1：100)、鼠抗人CD44v6单克隆抗体(稀释浓度1：100)及SP超敏即用型试剂盒等均由福州迈新生物技术开发公司提供。组织经10 %中性福尔马林固定，石蜡包埋，切片厚度4 um，连续切片分别做常规HE和免疫组织化学SP染色，免疫组织化主要操作步骤：严格按试剂盒说明书进行。阴性对照用PBS代替一抗，用已知的阳性组织切片作阳性对照。
1.4实验结果判定 pl6蛋白阳性着色主要定位于胞浆，部分胞核呈阳性染色，胞浆呈棕黄色或呈明显棕黄色颗粒；CD44v6蛋白蛋白主要以细胞浆出现棕黄色染色为阳性，可同时伴或不伴有胞浆弥漫性着色。镜下观察10个高倍镜视野(10×40)，并根据阳性细胞占视野中癌细胞总数的比例分为(-)：细胞内无棕黄色着色，或与切片背景染色一致者；(+)：阳性细胞<25 %；(+ +)：阳性细胞为25 %-50% ；(+++)：阳性细胞>50 %。
1.5统计学处理 应用SPSS17.0版本统计学软件对结果进行分析。两样本均数比较行t检验，计数资料比较用χ2检验，以P≤0.05为差异有统计学意义。
2结果
2.1胃癌按细胞分化程度分为高分化腺癌6例，中分化22例，低(未)分化65例。
2.2免疫组化结果 p16蛋白着色于癌细胞核及胞浆，CD44v6 着色于癌细胞膜。不同组织类型和分化程度的胃癌其分布方式无明显差异。93例胃癌中，p16蛋白阳性37例(39.78%)，CD44v6阳性39例(41.94%)。与对照组比较，均有显著性差异(P<0.05，P<0.05)。见表1。在胃癌的阳性表达与患者性别、年龄、组织分化程度、TNM分期及淋巴结转移情况的关系见表2。p16蛋白在淋巴结转移阳性组的表达率30.8%，显著低于淋巴结转移阴性组的表达率60.7%(P<0.01)。CD44v6在进展期胃癌、淋巴结转移阳性组的阳性表达率43.8%、52.3%，显著高于早期胃癌、淋巴结转移阴性组的阳性表达率9.1%、17.9%(P<0.05，P<0.01)。
2.3 CD44v6与p16的表达与患者预后的关系 p16、CD44v6的表达均与患者的预后有关，P16阳性表达者生存期≥3年及5年者分别为30.8% 、18.92%，而阴性者分别为25% 、10.71% 。CD44v6阳性表达者≥3年及5年的生存率分别为20.51%、10.26% ，而阴性者则分别是44.44% 、22.22%，见表3。但用Cox比例风险模型分析，只有P16是独立的预后因子，见表4。
2.4 CD44v6与P16表达的关系 在CD44v6呈阳性表达的37例胃癌中，P16呈阳性表达的有9例，CD44v6呈阴性表达的54例中P16呈阳性表达的有28例，经统计分析，二者在胃癌组织中表达的关系(r =-0.476，P= 0.007)，说明在胃癌组织中，CD44v6的表达随着P16表达的减弱而增强，二者之间存在负相关的关系，见表5。
3 讨论
细胞之间或细胞与细胞外基质之间黏附特性的异常，是肿瘤细胞区别于正常细胞的一个重要生物学特征。这种黏附特性的异常赋予肿瘤细胞从原发部位脱落并向邻近正常组织浸润的能力，而肿瘤侵袭能力的大小是肿瘤恶性程度高低的标志之一。CD44基因于1980年由Dalchau等采用单克隆技术检测并确定的。CD44分子是细胞表面的黏附分子之一，根据基因外显子表达方式的不同编码生物学特性不同的两种蛋白：标准型(CD44s)和变异型(CD44v)。CD44s的生理功能主要是参与细胞与细胞、细胞与间质之间的粘连；介导淋巴细胞的归巢及细胞的迁移。CD44v则主要出现在机体的病理过程，特别是肿瘤的发生、发展过程中[1]。CD44v的出现改变了肿瘤细胞表面黏附分子的构成和功能，使肿瘤细胞侵袭与转移能力增强。CD44v6是CD44的一种拼接异构体，其表达可改变肿瘤细胞表面黏附分子的构成和功能，有助于肿瘤细胞获得转移潜能。CD44v6的促进转移作用机制可能是表达CD44v6的肿瘤细胞与远隔的淋巴管和血管内某一配体结合，使转移至那里的肿瘤细胞更加稳定地寄宿与生长，有效形成转移瘤。近年来通过免疫组化和原位杂交技术研究发现，CD44v6的过量表达与多种人体恶性肿瘤，如乳腺癌、胃癌、食管癌、宫颈癌等许多肿瘤的发生、发展、侵袭及转移密切相关 ，认为CD44v6可作为独立的预后指标[1，2]。较多研究资料显示：CD44v6阳性表达的肿瘤较阴性表达者恶性程度高，发展快，淋巴结转移率高，术后易复发，生存期短，预后差。本实验结果显示：CD44v6在胃癌中的阳性表达率为54% ；在胃癌侵及黏膜及黏膜下层时，即胃癌的早期，就有CD44v6的阳性表达，且其阳性表达率随胃癌的浸润深度的加深而升高，这说明CD44v6的异常表达开始于胃癌的早期，且贯穿于胃癌的整个浸润过程；其阳性表达率与淋巴转移呈正相关，提示CD44v6的阳性表达参与了转移过程。阳性者3年生存率明显低于阴性者，提示该基因的异常表达有可能成为一个较好估计预后的指标。对于CD44v6的阳性表达者，应于术后严格进行化疗，预防胃癌的复发与转移。, 百拇医药(杨胜 熊兵红 马利 程勇 张才全)
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