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编号:12854457
GHSR1a shRNA慢病毒载体的构建及其对体内直肠癌生长和凋亡的影响(3)
http://www.100md.com 2016年4月16日 《医学信息》 2016年第15期
     1.6 制备裸鼠直肠癌SW480细胞皮下移植瘤模型及分组。取对数生长期的空白对照组、阴性对照组和感染组SW480细胞,用不含血清的DMEM培养基调整密度为5×106个/ml,裸鼠皮肤消毒后,将100 uL上述细胞悬液注射至裸鼠左腋窝皮下,每组8只,接种肿瘤后裸鼠置于(Specefic pathogen Free, SPF)环境下饲养。注射肿瘤细胞后第40 d时处死裸鼠,剥离裸鼠皮下肿瘤标本后称重。

    1.7免疫组织化学法(IHC)检测皮下移植瘤组织中Ki-67的表达 所有标本经4%中性甲醛固定、石蜡包埋、5 um切片后脱蜡至水,按照ABC免疫组化检测试剂盒操作说明进行操作,采用免疫组织化学SABC法。高温高压5 min抗原修复后阻断内源性过氧化酶在室温下孵育 10分钟,Ki-67稀释比例为1:100,阴性对照以PBS代替一抗,表达阴性。Ki-67表达结果判定参考Kunnumakkara[6]等的方法,Ki-67染色阳性细胞为细胞核为棕褐色,其余部位不着色,,在低倍镜(×100)下随机选择20个视野(每个视野计数200个细胞),计数染色阳性细胞所占比例。

    1.8 TUNEL法检测皮下移植瘤细胞凋亡 每组标本按TUNEL试剂盒说明书操作 ......
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