诺如病毒检测技术研究(2)
2.3病毒的富集 在检测食品与水中诺如病毒时，由于病毒含量小，此时病毒的富集成为了最关键的环节，如膜过滤法和有机絮凝沉淀法[9]等富集手段。在采样后，食品样品的处理主要有两个步骤：先对样本基质上诺如病毒的洗脱和浓缩，然后提取诺如病毒的核酸，其中由以从样本基质上洗脱和浓缩诺如病毒最为关键[10]。邓丽丽等[11]在用荧光定量RT-PCR技术检测牡蛎中诺如病毒时，着重摸索前处理方法，即病毒的富集，他们通过化甘氨酸缓冲液处理牡蛎匀浆液，摸索聚乙二醇(PEG)沉淀浓缩病毒的浓度，得到甘氨酸缓冲液pH值为4.5，PEG沉淀浓度为16%时的诺如病毒富集提取效果最好。周晓红等[12]评估了用混合硝酸纤维素膜(MCE)和PEG沉淀共二次富集的方法检测水中诺如病毒的方法，证明该方法将水样浓缩了1000倍，大大提高了灵敏度，可用于水体中诺如病毒的检测。李楠等[13]比较了磁珠富集法和PEG沉淀法检测草莓中GⅡ型诺如病毒的适用性，结果显示磁珠富集法的回收率略高于PEG沉淀法的回收率，而且两种方法的回收率结果均能满足检测要求，均适用于检测草莓中的GⅡ型诺如病毒，该研究也给其他的食品类样本的病毒富集提供了一定的參考。张其刚等[14]比较猪胃黏蛋白偶联磁珠和PEG8000富集检测了青葱和葡萄中的诺如病毒，结果显示对青葱来说，高接种量下两种富集方法回收率差不多，低接种量下猪胃黏蛋白偶联磁珠法的回收率高于PEG8000，而对于葡萄来说，猪胃黏蛋白偶联磁珠法高低接种量的回收率均高于PEG8000，显示PGM-MB法富集效果要好于PEG8000，这与研究[13]的结果是吻合的。徐奋奋等[15]将不同浓度的GⅡ型诺如病毒加入水中，用钙离子法富集，研究结果显示钙离子富集法对水中GⅡ型诺如病毒的检测回收率可以达到81.6%，检测灵敏度达到10copies/μL，均较好，且具备快速简便的优点，适用于基层实验室进行水中GⅡ型诺如病毒的快速检测。
, 百拇医药
2.4反转录-环介导等温扩增 罗剑鸣等[16]建立了一种基于颜色判定的GⅡ型诺如病毒的RT-LAMP检测技术，通过扩增前加入羟基萘酚蓝染料，以颜色变化判断结果，结论显示此方法与常规RT-PCR相比灵敏度相当，检测效率更高，可用于GⅡ型诺如病毒的现场快速检测。
2.5基因芯片 史蕾等[17]用链霉亲和素包被的磁珠作标记物，以生物素标记的核算为样本，通过它们的亲和作用，进行核算杂交检测，建立了基于磁珠的可视化基因芯片检测诺如病毒，结论显示该方法灵敏度、特异性、重复性均较好，且具有快速、直观的优点。
2.6酶联免疫吸附测定 温来欣等[18]建立了异硫氰算荧光素(FITC)-抗FITC放大系统的检测人粪便中诺如病毒抗原的ELISA法，通过与商业化酶联免疫法试剂盒比对，得出该方法灵敏度、特异性均较好，且具有成本低的优点。
3 总结
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依据诺如病毒的污染途径，粪便、食品、水成为了诺如病毒检测的主要样本，粪便的检测技术的研究相对更成熟，对于食品和水来说，怎样合理有效的将病毒富集，避免过程的损失成为检测灵敏度是否满足要求的决定性环节，故食品和水中诺如病毒检测的相关研究聚焦于病毒的富集技术是必要的。
诺如病毒的检测技术发展至今，实时荧光定量RT-PCR技术因其具备可靠的灵敏度、特异性等优势已经成为应用最为广泛的检测技术，同时为了适应疫情暴发的及时处置，一些更加适合现场快速检测的试剂条、试剂盒等技术也正在快速发展。对研究者来说，怎样处理好准确灵敏与简便高效这二者之间的平衡对诺如病毒检测技术的发展具有重要意义。
参考文献：
[1]徐友富，童贻刚，茹志涛，等.诺如病毒感染国内外研究概况[J].中国卫生检验杂志，2008，18(5)：949-951.
[2]Division of Viral Diseases，National Center for Immunization and Respiratory Diseases，Centers for Disease Control and Prevention.Updated norovirus outbreak management and disease prevention guidelines[J].MMWR Recomm Rep，2011，60(RR-3)：1-18.
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[3]李志凯，苏国成，苏文金.等.诺如病毒检测方法研究进展[J].微生物学通报，2014，41(7)：1417-1424.
[4]王作虪，韩悦，安淑一，等.诺如病毒RT-PCR检测及进化树分析[J].中国卫生检验杂志，2008，18(5)：783-785.
[5]陈传德，周晓红，莫艳玲，等.荧光定量RT-PCR定量检测诺如病毒方法的建立及其评价[J].中国卫生检验杂志，2010(3)：467-469.
[6]刘巍，隆文杰，石玲玲，等.应用实时荧光定量RT-PCR技术快速检测基因Ⅱ型诺如病毒[J]. 应用预防医学，2007，13(3)：129-132.
[7]王毅谦，石晶，吴福平，等. GI和GII型诺如病毒双重荧光RT-PCR法检测[J].中国公共卫生，2013，29(4)：599-602.
, 百拇医药
[8]莫雪梅，高东微.SYBR GreenⅠ荧光RT-PCR法检测贝类中的诺如病毒[J].生物工程学报，2010，26(6)：817-822.
[9]周晓红，李晖，杨杏芬.食品中诺如病毒RT-PCR检测技术研究进展[J].环境卫生学杂志，2009(4)：234-238.
[10]谢雅晶，刘贤金.食源性诺如病毒在果蔬农产品中的污染及检测研究[J].病毒学报，2015(6)：685-697.
[11]邓丽丽，刘巍，莫建光，等.应用荧光定量RT-PCR法检测牡蛎中诺如病毒[J].中国热带医学，2011，11(2)：133-135.
[12]周晓红，李晖，杨杏芬，等.水中诺如病毒富集及定量检测研究[J].热带医学杂志，2010，10(2)：137-140.
, 百拇医药 [13]李楠，王佳慧，李凤琴，等.检测鲜草莓中GⅡ型诺如病毒的两种富集方法比较[J].中国食品卫生杂志，2015，27(3)：242-246.
[14]张其刚，潘良文，李想，等.猪胃黏蛋白偶联磁珠和聚乙二醇富集检测青葱和葡萄中诺如病毒的比较研究[J].食品科学，2012(16)：241-245.
[15]徐奋奋，蔡颖，黄亚琴，等.水中诺如病毒浓缩与应急检测研究[J].中国卫生检验杂志，2015(7)：977-979.
[16]罗剑鸣，吴希阳，徐子乾，等.基于颜色判定的逆转录环介导等温扩增技术检测GII型诺如病毒基因[J].病毒学报，2012，28(2)：165-171.
[17]史蕾，顾大勇，徐云庆，等.基于磁珠的可视化基因芯片在诺如病毒快速检测中的应用[J]. 中国热带医学，2009，9(4)：596-598.
[18]温来欣，司萍，杨东平，等.诺如病毒抗原的异硫氰酸荧光素标记-酶联免疫吸附检测法[J].环境与健康杂志，2015，32(3)：252-255.
收稿日期：2017-7-8；修回日期：2017-8-12
编辑/成森, 百拇医药(潘卫兵 许韡)
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2.4反转录-环介导等温扩增 罗剑鸣等[16]建立了一种基于颜色判定的GⅡ型诺如病毒的RT-LAMP检测技术，通过扩增前加入羟基萘酚蓝染料，以颜色变化判断结果，结论显示此方法与常规RT-PCR相比灵敏度相当，检测效率更高，可用于GⅡ型诺如病毒的现场快速检测。
2.5基因芯片 史蕾等[17]用链霉亲和素包被的磁珠作标记物，以生物素标记的核算为样本，通过它们的亲和作用，进行核算杂交检测，建立了基于磁珠的可视化基因芯片检测诺如病毒，结论显示该方法灵敏度、特异性、重复性均较好，且具有快速、直观的优点。
2.6酶联免疫吸附测定 温来欣等[18]建立了异硫氰算荧光素(FITC)-抗FITC放大系统的检测人粪便中诺如病毒抗原的ELISA法，通过与商业化酶联免疫法试剂盒比对，得出该方法灵敏度、特异性均较好，且具有成本低的优点。
3 总结
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依据诺如病毒的污染途径，粪便、食品、水成为了诺如病毒检测的主要样本，粪便的检测技术的研究相对更成熟，对于食品和水来说，怎样合理有效的将病毒富集，避免过程的损失成为检测灵敏度是否满足要求的决定性环节，故食品和水中诺如病毒检测的相关研究聚焦于病毒的富集技术是必要的。
诺如病毒的检测技术发展至今，实时荧光定量RT-PCR技术因其具备可靠的灵敏度、特异性等优势已经成为应用最为广泛的检测技术，同时为了适应疫情暴发的及时处置，一些更加适合现场快速检测的试剂条、试剂盒等技术也正在快速发展。对研究者来说，怎样处理好准确灵敏与简便高效这二者之间的平衡对诺如病毒检测技术的发展具有重要意义。
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[11]邓丽丽，刘巍，莫建光，等.应用荧光定量RT-PCR法检测牡蛎中诺如病毒[J].中国热带医学，2011，11(2)：133-135.
[12]周晓红，李晖，杨杏芬，等.水中诺如病毒富集及定量检测研究[J].热带医学杂志，2010，10(2)：137-140.
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[18]温来欣，司萍，杨东平，等.诺如病毒抗原的异硫氰酸荧光素标记-酶联免疫吸附检测法[J].环境与健康杂志，2015，32(3)：252-255.
收稿日期：2017-7-8；修回日期：2017-8-12
编辑/成森, 百拇医药(潘卫兵 许韡)