人ＶＥＧＦ基因昆虫杆状病毒表达载体的构建
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提要：为了在昆虫杆状病毒表达系统表达人血管内皮细胞生长因子(VEGF)基因，用Hind Ⅲ对pcDNA3.1/VEGF进行酶切，回收575bp的VEGF片段，与pFastBacI载体连接，得到含VEGF基因的转座载体pFast/VEGF，NcoI酶切鉴定方向；将其转化到含有穿梭载体杆粒(Bacmid)的DHl0Bac感受态细胞，得到重组杆状病毒穿梭载体BaCiTUd/VEGF，采用琼脂糖凝胶电泳、PCR扩增对重组转座载体、穿梭载体进行鉴定。将Bacmid/VEGF转染sf-9细胞，进行病毒重组及噬斑筛选。结果：琼脂糖电泳得到杆粒(Bacmid)DNA条带，PCR扩增得到575bp的VEGF片段，病毒液在10-7稀释度时出现噬斑，约50个/孔。说明已成功构建了重组杆状病毒穿梭载体并重组出杆状病毒。
关键词：人VEGF；重组杆状病毒载体；PCR；噬斑筛选
中图分类号：Q78
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