小红参抗心肌缺血活性部位的筛选研究
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摘要：目的：初步筛选小红参抗心肌缺血的活性部位。方法：采用pit尾静脉注射方法制备大鼠急性心肌缺血模型。将SD大鼠随机分为8组：正常对照组、模型组、消心痛组、复方丹参滴丸组、小红参A、B、C、D药物组。各组均在连续灌胃15d后造模，测定大鼠15、30s，1、3、5、10、20min心电图，腹主动脉采血，制备血清测定AST、CK、LDH、SOD、MDA含量。结果：小红参提取物各极性段物质A、B、C、D都具有抗心肌缺血的作用(J点位移与模型组比较P<001)，以C段物质作用比较明显；小红参各极性段物质可明显降低血清心肌酶AST、CK、LDH和MDA的含量，提高血清SOD活性(P<005或P<001)，作用以B、C两段物质较为明显。结论：小红参抗心肌缺血的活性部位主要集中在B、C段，作用可能与抗氧化有关，具体有效成分及作用机制还待进一步研究。
关键词：小红参；心肌缺血；活性部位；实验研究
中图分类号：R285文献标识码：A
文章编号：1007-2349(2011)11-0070-03
小红参又名云南茜草，为云南特有的民族药，主要分布于云南中部和北部，是茜草科茜草属植物滇茜草的干燥根及根茎。具有活血通经、祛风除湿、调养气血等功效。长期以来被云南少数民族应用来治疗心血管疾病(心绞痛、冠心病)，并取得良好临床疗效。
1实验材料和仪器
11实验动物SD雄性大鼠，体重(180±30)g，由四川省医学科学院实验动物研究所提供，动物合格证号：SCXK(川)2010-22。
12药品与试剂小红参，购自云南中医学院门诊。小红参提取物不同活性部位A、B、C、D，由云南中医学院中药学院中药化学分析实验室协助制备。复方丹参滴丸(天津天士力制药有限公司，批号100207)，垂体后叶素(pit，天津生物化学制药有限公司，批号20090702)，SOD试剂盒(南京建成生物工程研究所)，MDA试剂盒(南京建成生物工程研究所)，消心痛(江苏方强制药有限责任公司，批号20091129)
13实验仪器旋转蒸发仪(上海予华仪器设备有限公司)，AB-8型号大孔树脂(安徽三星树脂科技有限公司)，BL-420E生物信号采集系统(成都泰盟科技有限公司)，台式低速离心机(上海电机厂)。
2实验方法
21动物造模参照文献方法[1]制备大鼠急性心肌缺血模型。实验前一天进行pit敏感性筛选。(挑选标准：①具备Q-RS-T波群；②J点上升或ST段抬高或压低01mv以上，T波先高耸后低平或倒置的大鼠作为实验用鼠)。正常对照组大鼠尾静脉注射生理盐水，其余各组尾静脉注射Pit06U/kg，10s内匀速注射完毕。
22分组及给药将挑选出的敏感SD大鼠64只，随机分为正常对照组、模型组、消心组、复方组、小红参活性部位A、B、C、D组，每组8只。在正常饲养基础上，同时给予相应成分溶液连续灌胃15d后复制模型。
23检测指标
231大鼠心电图末次给药15h后各组大鼠用10%水合氯醛025mL/100g腹腔注射，麻醉后背位固定。造模前，用BL-420E生物信号采集系统采集II导联正常心电图5min，造模后，分组记录各组注射pit完毕后15、30s，1、3、5、10、20min的心电图。
232血清心肌酶(AST、CK、LDH)及超氧化物歧化酶(SOD)和丙二醛(MDA)含量待大鼠心电图记录完毕后，腹主动脉取血，低速离心3000r/min，15min，取血清保存于-20℃冰箱，送云南中医学院第一附属医院检测。
233统计学方法使用SPSS170软件进行处理，所有数据均用均数±标准差(Ax-G±s)表示，采用单因素方差分析。若满足正态方差齐性，用LSD法进行分析。方差不齐时，用Tamhane’sT2法。
3结果
31对大鼠急性心肌缺血心电图的影响见表1。由表1看出：①模型组与正常对照组比较，缺血后各时间点J点与正常对照组比较均有显著性差异(P<001)，提示造模成功；②各药物组与模型组比较具有统计学意义(P<001)，表明各药物对急性心肌缺血后20min内都有不同程度的预防治疗作用；③各药物组与正常组比较：在急性心肌缺血后5min时间段与正常对照组比较具有显著差异(P<005)，表明正常对照组与药物治疗组之间有差异；在缺血后10min，C药物组与正常组比较没有显著性差异(P>005)，在缺血后20min，B药物组与正常组比较没有显著性差异(P>005)，提示B段、C段物质对心肌缺血具有稳定、显著的保护作用。
32对大鼠急性心肌缺血心率的影响见表2。由表2看出：①模型组与正常对照组比较，缺血后各时间点心率与正常组比较均有显著性差异(P<001)，提示造模成功；②各药物组与模型组比较：C药物组与模型组比较具有统计学意义(15s，P<005)，A、B、C、D药物组与模型组比较，在缺血后30s，1、3、5、10、20min内没有显著差异(P>005)，但对缺血后心率改善均有上升趋势，提示A、B、C、D对pit导致的急性心肌缺血心率降低改善作用不明显。
33对急性心肌缺血大鼠心肌酶的影响见表3。由表3看出：①模型组与正常对照组比较，缺血前后大鼠血清心肌酶有显著性差异(P<005)，提示造模成功；②各给药组与模型组比较，大鼠血清心肌酶差异具有统计学意义(P<005)，表明各药物对急性心肌缺血后心肌损伤有不同程度的预防保护作用；③各药物组的治疗效果以B药物组效果较为明显。
34对急性心肌缺血大鼠超氧化物歧化酶(SOD)及丙二醛(MDA)含量的影响见表4。由表4看出：①各给药组与模型组比较：SOD及MDA均有差异具有统计学意义(P<005)，表明各药物对急性心肌缺血均有提高SOD活性，降低丙二醛含量，从而对心肌缺血发挥预防治疗的保护作用；②各药物组的治疗效果：在提高SOD活性上以C物质明显；在降低丙二醛含量上以B物质作用明显。
4讨论
现代医学认为心肌缺血是指心脏的血液灌注减少，导致心脏的供氧减少，心肌能量代谢不正常，不能支持心脏正常工作的一种病理状态[2]。心肌缺血是多种心脏疾患的初始阶段，临床上主要表现为冠心病心绞痛、心肌梗死等心肌缺血性症状，属于中医“胸痹”、“心痛”范畴。其病性总属本虚标实，心脉痹阻为发病主要病机，基本治法为活血化瘀、宣痹通阳、扶正固表等[3]。
心电图测量作为无创性检查手段，对心肌缺血的评估、诊断、预防等有很大帮助。血清心肌酶为多年来临床上作为心肌坏死的检测标记物，心肌缺血坏死时，细胞膜的完整性受到损害，膜的通透性增加，酶由细胞内因释放而减少，血清中酶活性增加。因此，心肌酶AST、CK、LDH的检测对心肌受损程度具有一定参考价值，也可以作为心肌梗塞范围的定量指标[4]SOD是机体防御新陈代谢及其他生命活动中氧自由基损伤和破坏的抗氧化酶。大量氧自由基生成及脂质过氧化反应是心肌缺血损伤的主要机制之一[5]；MDA是氧自由基攻击生物膜不饱和脂肪酸发生脂质过氧化反应的终产物 ......
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