桃红四物汤对大鼠背部随意皮瓣存活的影响
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摘 要：目的：探讨桃红四物汤对SD大鼠背部随意皮瓣存活的影响。方法：将40只SD大鼠随机分为桃红四物汤组和对照组各20只，背部制成2 cm×8 cm随意皮瓣，分别进行皮瓣存活率、微血管密度(MVD)的检测。结果：桃红四物汤组第7 d皮瓣存活率高于对照组(P<0.05)；桃红四物汤组皮瓣内见较多新生血管，高倍镜视野下单位MVD超过对照组(P<0.05)。结论：桃红四物汤灌胃给药能促进大鼠背部随意皮瓣的存活比例，其机制可能与促进皮瓣血管新生有关。
关键词：桃红四物汤；随意皮瓣；存活
中图分类号：R285.5文献标识码：A
文章编号：1007-2349(2012)01-0057-02
随意皮瓣是修复创面、重建功能、改善外形常用的皮瓣[1]。在整形与重建外科领域中，往往需要利用皮瓣来修复组织的缺损；但随意皮瓣的成活有严格的长宽比例限制，一旦超出该比例，临床上皮瓣远端的缺血坏死屡见不鲜，给患者身心造成了极大的痛苦，因此寻找有效的方法预防术后皮瓣的缺血坏死具有重要的临床意义。
桃红四物汤在预防及治疗皮瓣坏死，促进其存活的临床研究中取得了较好的效果。本次实验用桃红四物汤旨在观察其促进大鼠背部随意皮瓣存活的作用，并探讨其对新生血管的影响及促进皮瓣存活的作用机制。
1 实验材料
1.1 实验动物 清洁级SD雄性大鼠40只，体重(220±20)g，由川北医学院动物实验中心提供，合格证号：SCXK(川)2008-18。
1.2 药物 桃红四物汤由桃仁、红花、当归、白芍、熟地、川芎6味中药组成，药物购自北京同仁堂成都分店。以上药物加水浸泡1 h，常规煎煮、过滤及水浴蒸发制成1 mL含1 g生药的水煎液(浓度100%)，4 ℃冰箱保存备用。
1.3 试剂 CD34试剂盒，批号：BA3414购自武汉博士德生物工程有限公司；生物素化山羊抗兔IgG(H+L)，批号：ZB-2050，购自北京中杉金桥生物技术有限公司；辣根酶标记链亲和素(HRP/A-V)，批号：ZB-2404，购自北京中衫金桥生物技术有限公司；DAB显色剂批号：DAB-0031，购自福州迈新生物技术有限公司。
2 实验方法
2.1 分组造模 将实验大鼠适应性喂养一周后，随机分为对照组20只，治疗组20只。10%的水合氯醛350 mg/kg腹腔注射麻醉大鼠，大鼠背部以8%硫化钠脱毛，温水洗净。设计2 cm×8 cm大小随意皮瓣，蒂位于双侧髂嵴连线上。切开皮肤及皮下筋膜浅层掀起皮瓣至肉膜深面，结扎基底部活跃出血点。3-0丝线将皮瓣原位缝合，切口涂红霉素软膏。所有手术均由同一人完成，术后大鼠分笼喂养。
2.2 给药方法 造模的同时开始给药，每日1次。治疗组以桃红四物汤浸膏0.8 mL/100 g灌胃，对照组以等量生理盐水灌胃，共7 d。
2.3 检测指标
2.3.1 皮瓣存活率 皮瓣坏死以皮肤颜色变黑、组织回缩、弹性差、质地变硬、切割组织不出血为标准。术后第7 d，乙醚麻醉大鼠后，仰卧位置扫描仪上，扫描皮瓣，并以Image-Pro Plus 6.0软件分析皮瓣坏死区域，利用公式(皮瓣存活率=皮瓣存活表面积/皮瓣总表面积×100%)，计算各组皮瓣存活率。
2.3.2 组织学观察 沿皮瓣中轴线的近、中、远三段(距离蒂部2、4、6 cm 部位)中心切取大小为1.0 cm x 1.0 cm的全层皮瓣组织，10%甲醛固定，石蜡包埋，4 μm厚切片，HE染色，光镜下观察病理学结果。
2.3.3 皮瓣微血管密度(MVD)计数 采用CD34免疫组织化学染色。凡与周围结缔组织成分分离、经CD34抗体染成棕黄色的单个内皮细胞或内皮细胞簇被认为是1个微血管。每张切片在中央区随机选取8个高倍视野，计数所有微血管，然后求其平均数。
2.4 统计学处理 所有数据均用SPSS 13.0统计软件包进行分析，数据以均数±标准差(Ax-G ±s )表示，2组独立样本均 数比较用t检验，P<0.05为差异有统计学意义。
3 实验结果
3.1 皮瓣成活率测定 术后第7 d，与空白对照组比较，桃红四物汤组皮瓣的平均成活率明显增多(P<0.05)。见表1。
3.2 组织学观察 所有皮瓣坏死区的组织学形态相似，均表现为急性炎症、中性粒细胞和单核细胞浸润。桃红四物汤组皮下成纤维细胞增生明显，肉芽组织增生显著，皮下组织水肿不明显，血管扩张；空白对照组皮下成纤维细胞，肉芽组织，毛细血管增生均明显低于桃红四物汤组。
3.3 微血管密度检测 桃红四物汤组经CD34抗体染色阳性微血管数中段明显多于空白对照组，差异有统计学意义(P<0.05)。见表2。
4 讨论
近年来随着细胞生物学和分子生物学的不断发展，对皮瓣存活的发生机制的研究不断深入，其重在改善自身血液循环状态，促进缺血皮瓣血管的新生。因此，在促进皮瓣存活的治疗过程中，如何让缺血皮瓣微循环重建，成为目前治疗缺血皮瓣存活的重要方面。
近代中医研究皮瓣，多认为血虚夹瘀。血瘀是本病主要的病因，治疗上应以养血以扶正，活血以化瘀祛邪 ......
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