益母生化饮长期稳定性研究
摘要：目的根据益母生化饮的质量标准，对其稳定性进行考察。方法按长期稳定性试验方法对其质量进行稳定性跟踪考察。结果益母生化饮质量稳定，有效期可定为2年。结论在现行的包装材料、生产工艺、质量标准的控制下，经2年考查益母生化饮质量稳定。
关键词：益母生化饮；质量；稳定性研究
中图分类号：R283文献标志码：B文章编号：1007-2349(2017)01-0079-02
益母生化饮是玉溪市中医医院自主研发的院内制剂，由当归、赤芍、益母草等10味中药组成，具有益气健脾、活血化瘀、温经止痛的功效。用于产后恶露不绝，小腹冷痛，气血虚月经不调等。批准文号：滇药制字(Z20082810F)。首次获批效期为6个月。随着临床用量的扩大，生产量也在逐渐增大。效期短成为严重影响日常生产与使用的瓶颈。为考察其质量稳定性，本试验依据质量标准和长期稳定性实验方法，对其质量进行2年的考查。现将有关结果报道如下。
1仪器与试药
SB5200DT超声波清洗器(SHANGHAI BRANSON)；BSA224S电子天平(塞多利斯科学仪器有限公司)；H·H·S21-4B恒温水浴锅(上海医疗器械五厂)；ZF-2型三用紫外仪(上海安亭电子仪器厂)；303-□型隔水式培养箱(上海金沪电热仪器联营厂)；隔水式电热恒温培养箱(上海市跃进医疗器械一厂)；YJ-1300A医用净化工作台(苏州净化设备公司)；PHS-3C型PH计(上海精密科学仪器有限公司)；附温比重瓶(江苏海门市测温仪器厂)。
当归对照药材(中国食品药品检定研究院，批号：120927-200315)；芍药苷对照品(中国食品药品检定研究院，批号：0736-200219)；试剂均为分析纯。试药益母生化饮(20080703、20090104、20090919)，蒸馏水均为自制。
2方法
实验按照“益母生化饮质量标准”，参考《中国药典》2005版二部附录XIX C)的第二部份 药物制剂项下(二)长期试验的相关规定。将3批待考查的供试品，市售包装在温度(25±2)℃，相对湿度60%±10%的条件下放置24个月。每3个月取样一次，分别于0、3、6、9、12、18、24个月取样，按照益母生化饮质量标准有关项下的方法进行检测。
2.1性状本品为棕色至棕褐色的液体；久置可产生经振摇易散的沉淀。味苦、微甘。
2.2鉴别
2.2.1取益母生化饮100 mL，加乙醚30 mL振摇提取，分取乙醚液，滤液挥至1 mL，作为供试品溶液。另取当归对照药材0.5 g，加乙醚30 mL，超声处理5 min，滤过，滤液挥至1 mL，作为对照药材溶液。照薄层色谱法(《中国药典》2005年版一部附录 VI B)试验，吸取供试品溶液10～15 μL、对照品溶液10 μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以石油醚(60～90℃)-乙酸乙酯(19：1)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外灯(365 nm)下檢视。供试品色谱中，在与对照药材色谱主斑点相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。
2.2.2取益母生化饮100 mL，置水浴上蒸干，加乙醇20 mL，分两次温热搅拌溶解，滤过。滤液蒸至近干，残渣加水15 mL，微热使溶解，用水饱和的正丁醇溶液20 mL分两次振摇提取，合并正丁醇提取液。用正丁醇饱和的水15 mL分两次洗涤，正丁醇液蒸干，加乙醇4 mL分两次溶解，乙醇液通过聚酰胺柱(聚酰胺5 g，内径1.2 cm)，用水50 mL洗脱，洗脱液蒸干，残渣加乙醇1 mL使溶解，作为供试品溶液。另取芍药苷对照品，加乙醇制成每1 mL含1 mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(《中国药典》2005年版一部附录 VI B)，吸取供试品溶液10～15 μL、对照品溶液8～10 μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-醋酸乙酯-甲醇-甲酸(40：5：10：0.2)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，热风吹至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应位置上，显相同颜色的斑点。
2.2.3吸取[鉴别](2)项下未通过聚酰胺柱前的第一次乙醇溶解液，点于滤纸上(宜分多次点样，注意勿使斑点扩散过大)晾干溶剂，沿点样处滴加稀碘化铋钾试液，斑点呈橘红色圈。
2.3通则检查项
2.3.1PH值参照《中国药典》2005年版一部PH值测定法，结果应为4.0～5.5。
2.3.2相对密度参照《中国药典》2005年版一部相对密度测定法，结果应不低于1.01。
2.3.3微生物限度参照《中国药典》2005年版一部微生物限度检查法，结果：细菌数<100 cfu/g；霉菌和酵母菌数<100 cfu/g；大肠埃希菌不得检出。
3结果
3.1性状3、6、9、12、18、24个月与0月比较，随着时间的变化，合剂颜色略变浅，沉淀物略有增加，经振摇均可分散。24月观察玻璃瓶上略有色素附着。
3.2鉴别当归、赤芍的薄层鉴别，3、6、9、12、18、24个月与0月比较，均检出与对照药材或对照品相对应的斑点；
益母草生物碱定性鉴别项，3、6、9、12、18、24个月与0月比较，均显正反应。即鉴别项均符合规定。
3.3pH值3、6、9、12、18、24个月与0月比较，3批益母生化饮的pH值在0.1范围波动，结果符合规定。结果见表1。
3.4相对密度3、6、9、12、18、24个月与0月比较，3批益母生化饮的PH值无明显变化，结果符合规定。试验结果见表2。
3.5微生物限度3、6、9、12、18、24与0月比较，3批益母生化饮均细菌数<100 cfu/g，霉菌数<100 cfu/g，大肠埃希菌未检出。符合规定。
4讨论
4.1该制剂采用传统汤药的煎煮方法，不添加任何防腐剂，结合现代湿热蒸汽灭菌技术制作而成。包装采用玻璃输液瓶，瓶盖为溴化丁基胶塞，以铝盖加压密封而成。成品是一个密封的液体制剂，制剂不开封基本处于一个无菌状态。在24个月的长期稳定性实验中，性状随贮存时间的延长略有改变，颜色略变浅，沉淀物略有增多，但经振摇均可分散均匀，所以注意事项注明服时摇匀。考虑可能因组方复杂，其中存在的某些高分子物质可能引起沉淀。三个鉴别项在规定时间均能检出，且无明显区别。提示三个鉴别项在该状态下基本稳定。相对密度项结果基本不变。在中药制剂中，相对密度一定程度上可指控溶液的浓稠程度。相密度基本不变提示制剂的整体浓度未发生明显变化。pH值在一个较小范围波动，统计无意义，考虑可能是实验误差。微生物检测均无菌生长。pH值与制剂微生物污染密切相关，中药的酸败变质时，pH值和微生物检测均会出现明显变化。该制剂开盖敞口在空气中放置，有的三天后逐渐出现酸败现象。pH值检测明显异常，微生物检测也不合格。所以在注意事项中特别提出本品开封后应在2日内服完。
4.2该制剂长期稳定性实验按实际批量生产的产品在规定条件下进行，24个月长期试验结果表明，在现有生产工艺、规格、包装材料和包装工艺条件下制成的益母生化饮，在试验条件下质量稳定。根据长期稳定性试验目的是为了制订药品的有效期提供依据，可定有效期为2年。
4.3在传统汤药的应用中，空气中微生物污染导致汤药不能长期贮存。该制剂采用的工艺和包材很好地解决了这个问题，使最终产品为无菌制剂，从而解决了微生物污染问题。我院已将该工艺用于多个临床经验方的初期产品开发使用中，均获得不错的效果。对于湿热蒸汽灭菌技术在中药制剂的适应性以及相关技术参数，课题组将进一步立题进行研究。
参考文献：
[1]国家药典委员会.中华人民共和国药典(二部)[S].北京：中国医药科技出版社，2005.
[2]国家药典委员会.中华人民共和国药典(一部)[S].北京：中国医药科技出版社，2010.
[3]郑虎占.中药现代研究与应用(第三卷)[M].北京：学苑出版社，2133-2136.
(收稿日期：2016-09-08), http://www.100md.com(马梦黎 庄彦 侯跃华 文金隆 孙娇 陈建芬)
关键词：益母生化饮；质量；稳定性研究
中图分类号：R283文献标志码：B文章编号：1007-2349(2017)01-0079-02
益母生化饮是玉溪市中医医院自主研发的院内制剂，由当归、赤芍、益母草等10味中药组成，具有益气健脾、活血化瘀、温经止痛的功效。用于产后恶露不绝，小腹冷痛，气血虚月经不调等。批准文号：滇药制字(Z20082810F)。首次获批效期为6个月。随着临床用量的扩大，生产量也在逐渐增大。效期短成为严重影响日常生产与使用的瓶颈。为考察其质量稳定性，本试验依据质量标准和长期稳定性实验方法，对其质量进行2年的考查。现将有关结果报道如下。
1仪器与试药
SB5200DT超声波清洗器(SHANGHAI BRANSON)；BSA224S电子天平(塞多利斯科学仪器有限公司)；H·H·S21-4B恒温水浴锅(上海医疗器械五厂)；ZF-2型三用紫外仪(上海安亭电子仪器厂)；303-□型隔水式培养箱(上海金沪电热仪器联营厂)；隔水式电热恒温培养箱(上海市跃进医疗器械一厂)；YJ-1300A医用净化工作台(苏州净化设备公司)；PHS-3C型PH计(上海精密科学仪器有限公司)；附温比重瓶(江苏海门市测温仪器厂)。
当归对照药材(中国食品药品检定研究院，批号：120927-200315)；芍药苷对照品(中国食品药品检定研究院，批号：0736-200219)；试剂均为分析纯。试药益母生化饮(20080703、20090104、20090919)，蒸馏水均为自制。
2方法
实验按照“益母生化饮质量标准”，参考《中国药典》2005版二部附录XIX C)的第二部份 药物制剂项下(二)长期试验的相关规定。将3批待考查的供试品，市售包装在温度(25±2)℃，相对湿度60%±10%的条件下放置24个月。每3个月取样一次，分别于0、3、6、9、12、18、24个月取样，按照益母生化饮质量标准有关项下的方法进行检测。
2.1性状本品为棕色至棕褐色的液体；久置可产生经振摇易散的沉淀。味苦、微甘。
2.2鉴别
2.2.1取益母生化饮100 mL，加乙醚30 mL振摇提取，分取乙醚液，滤液挥至1 mL，作为供试品溶液。另取当归对照药材0.5 g，加乙醚30 mL，超声处理5 min，滤过，滤液挥至1 mL，作为对照药材溶液。照薄层色谱法(《中国药典》2005年版一部附录 VI B)试验，吸取供试品溶液10～15 μL、对照品溶液10 μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以石油醚(60～90℃)-乙酸乙酯(19：1)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外灯(365 nm)下檢视。供试品色谱中，在与对照药材色谱主斑点相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。
2.2.2取益母生化饮100 mL，置水浴上蒸干，加乙醇20 mL，分两次温热搅拌溶解，滤过。滤液蒸至近干，残渣加水15 mL，微热使溶解，用水饱和的正丁醇溶液20 mL分两次振摇提取，合并正丁醇提取液。用正丁醇饱和的水15 mL分两次洗涤，正丁醇液蒸干，加乙醇4 mL分两次溶解，乙醇液通过聚酰胺柱(聚酰胺5 g，内径1.2 cm)，用水50 mL洗脱，洗脱液蒸干，残渣加乙醇1 mL使溶解，作为供试品溶液。另取芍药苷对照品，加乙醇制成每1 mL含1 mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(《中国药典》2005年版一部附录 VI B)，吸取供试品溶液10～15 μL、对照品溶液8～10 μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-醋酸乙酯-甲醇-甲酸(40：5：10：0.2)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，热风吹至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应位置上，显相同颜色的斑点。
2.2.3吸取[鉴别](2)项下未通过聚酰胺柱前的第一次乙醇溶解液，点于滤纸上(宜分多次点样，注意勿使斑点扩散过大)晾干溶剂，沿点样处滴加稀碘化铋钾试液，斑点呈橘红色圈。
2.3通则检查项
2.3.1PH值参照《中国药典》2005年版一部PH值测定法，结果应为4.0～5.5。
2.3.2相对密度参照《中国药典》2005年版一部相对密度测定法，结果应不低于1.01。
2.3.3微生物限度参照《中国药典》2005年版一部微生物限度检查法，结果：细菌数<100 cfu/g；霉菌和酵母菌数<100 cfu/g；大肠埃希菌不得检出。
3结果
3.1性状3、6、9、12、18、24个月与0月比较，随着时间的变化，合剂颜色略变浅，沉淀物略有增加，经振摇均可分散。24月观察玻璃瓶上略有色素附着。
3.2鉴别当归、赤芍的薄层鉴别，3、6、9、12、18、24个月与0月比较，均检出与对照药材或对照品相对应的斑点；
益母草生物碱定性鉴别项，3、6、9、12、18、24个月与0月比较，均显正反应。即鉴别项均符合规定。
3.3pH值3、6、9、12、18、24个月与0月比较，3批益母生化饮的pH值在0.1范围波动，结果符合规定。结果见表1。
3.4相对密度3、6、9、12、18、24个月与0月比较，3批益母生化饮的PH值无明显变化，结果符合规定。试验结果见表2。
3.5微生物限度3、6、9、12、18、24与0月比较，3批益母生化饮均细菌数<100 cfu/g，霉菌数<100 cfu/g，大肠埃希菌未检出。符合规定。
4讨论
4.1该制剂采用传统汤药的煎煮方法，不添加任何防腐剂，结合现代湿热蒸汽灭菌技术制作而成。包装采用玻璃输液瓶，瓶盖为溴化丁基胶塞，以铝盖加压密封而成。成品是一个密封的液体制剂，制剂不开封基本处于一个无菌状态。在24个月的长期稳定性实验中，性状随贮存时间的延长略有改变，颜色略变浅，沉淀物略有增多，但经振摇均可分散均匀，所以注意事项注明服时摇匀。考虑可能因组方复杂，其中存在的某些高分子物质可能引起沉淀。三个鉴别项在规定时间均能检出，且无明显区别。提示三个鉴别项在该状态下基本稳定。相对密度项结果基本不变。在中药制剂中，相对密度一定程度上可指控溶液的浓稠程度。相密度基本不变提示制剂的整体浓度未发生明显变化。pH值在一个较小范围波动，统计无意义，考虑可能是实验误差。微生物检测均无菌生长。pH值与制剂微生物污染密切相关，中药的酸败变质时，pH值和微生物检测均会出现明显变化。该制剂开盖敞口在空气中放置，有的三天后逐渐出现酸败现象。pH值检测明显异常，微生物检测也不合格。所以在注意事项中特别提出本品开封后应在2日内服完。
4.2该制剂长期稳定性实验按实际批量生产的产品在规定条件下进行，24个月长期试验结果表明，在现有生产工艺、规格、包装材料和包装工艺条件下制成的益母生化饮，在试验条件下质量稳定。根据长期稳定性试验目的是为了制订药品的有效期提供依据，可定有效期为2年。
4.3在传统汤药的应用中，空气中微生物污染导致汤药不能长期贮存。该制剂采用的工艺和包材很好地解决了这个问题，使最终产品为无菌制剂，从而解决了微生物污染问题。我院已将该工艺用于多个临床经验方的初期产品开发使用中，均获得不错的效果。对于湿热蒸汽灭菌技术在中药制剂的适应性以及相关技术参数，课题组将进一步立题进行研究。
参考文献：
[1]国家药典委员会.中华人民共和国药典(二部)[S].北京：中国医药科技出版社，2005.
[2]国家药典委员会.中华人民共和国药典(一部)[S].北京：中国医药科技出版社，2010.
[3]郑虎占.中药现代研究与应用(第三卷)[M].北京：学苑出版社，2133-2136.
(收稿日期：2016-09-08), http://www.100md.com(马梦黎 庄彦 侯跃华 文金隆 孙娇 陈建芬)