1 材料与方法

    1.1 主要材料及设备 SPF级10日龄大鼠(武汉同济医学院实验动物中心提供)、CO2恒温培养箱(日本SANYO公司)、超净工作台(苏净安泰)、生物倒置显微镜(重庆光电仪器总公司)、752紫外分光光度计(上海民怡仪器仪表有限公司)、台式离心机(Heal Force)、微型漩涡混合器(上海凌仪实业有限公司)、恒温水浴锅(武汉金宝华科技有限公司)、移液枪(上海佳安分析仪器厂)。

    1.2 主要试剂 DMEM/F12培养基(美国Hyclone公司)、胎牛血清(杭州四季青生物工程材料有限公司)、胰蛋白酶(Amresco公司)、II型胶原酶(北京博奥森生物技术有限公司)、重组大鼠白介素-1β(rratIL-1β，PeproTech公司)、地塞米松磷酸钠注射液(Solarbio公司)、葛根素标准品(Sigma公司)、无钙镁磷酸缓冲液(PBS)、一氧化氮试剂盒(南京建成生物工程研究所)、诱导型一氧化氮合成酶(南京建成生物工程研究所)。

    1.3 软骨细胞的原代培养及传代 取SPF级10日龄大鼠，脱颈处死后，在无菌条件下取出髋膝关节处的软骨组织块，于超净工作台内置入含10%双抗的PBS培养皿中，清洗一遍，再用不含双抗的PBs清洗三遍。然后将软骨组织块移入EP管，向EP管中滴入2-3滴PBS，然后用眼科剪将组织块剪至约1 mm3大小。将EP管中的PBS吸出，加入0.2%Ⅱ型胶原酶使组织块处于悬浮状态，置于37℃条件下消化过夜。消化完成后 ......