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编号:13403085
基于TGF-β1/p38MAPK通路探讨益血降浊汤对UUO大鼠肾纤维化的作用机制(3)
http://www.100md.com 2019年10月1日 《云南中医中药杂志》 2019年第10期
     1.7.5蛋白免疫印迹(Western Blot,WB)检测UUO大鼠肾组织中与炎症、ECM以及TGF-β1/p38MAPK通路相关蛋白表达情况 将60mg肾脏组织剪碎,磷酸盐缓冲液(PBS)反复冲洗,离心后加裂解液,匀浆,再离心取上清(即总蛋白),提取蛋白后,用BCA法测定蛋白浓度,通过Tris-甘氨酸溶解凝胶分离20-30μg总蛋白,并转移至0.45μm PVDF膜上。在5%脱脂奶粉封闭缓冲液中温育1 后,将膜在4℃下与第一抗体一起温育过夜。次日洗涤后滴加二抗,于摇床上室温孵育1h,取出PVDF膜,显色液显色,全自动化学发光图像分析系统扫描光密度,使用Image J软件测定各蛋白的相对光密度值,以α-微管蛋白(α-tubulin)为参照。

    1.8统计学分析采用GraphPad Prism软件进行统计学分析。计量资料数据用(x±s)表示,多样本均数比较采用单因素方差分析,P<0.05表示差异有统计学意义。

    2结果

    2.1益血降浊汤对UUO大鼠体重与尿量的影响通过分析大鼠体重和尿量的数据,笔者观察到,UUO模型大鼠的体重和尿量较假手术组明显下降,而益血降浊汤(低、中、高)和依那普利均能逆转体重和尿量的减少。值得注意的是,UUO大鼠体重和尿量的增长与益血降浊汤的剂量呈正相关 ......
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