酵母双杂交文库筛选及hTRIP15与Y盒结合蛋白-1相互作用的探讨
Y盒结合蛋白-(YB-),GSTpulldown试验
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彭永德 宋怀东 曲建 张新 韩泽广 陈家伦 上海交通大学附属第一人民医院 上海第二医科大学瑞金医院 国家人类基因组南方研究中心 国家人类基因组南方研究中心 国家人类基因组南方研究中心 上海第二医科大学瑞金医院
【摘要】为探讨甲状腺素受体相互作用蛋白(hTRIP15)是否与其他核蛋白发生相互作用,以hTRIP15作为诱饵,用酵母双杂交技术筛选人肝cDNA文库,在高严格度选择培养基(SD-Trp-Leu-Ade-His)上长出的克隆773个,再经β-gal表达和PCR等技术进一步缩小范围,经Blastn搜寻最终显示2个重复克隆编码一种共调节辅因子——Y盒结合蛋白-1(YB-1).将插入序列与全长YB-1比较发现进入ORF内230bp,插入序列编码82aa,该蛋白称为YB-1-p,经蛋白体外翻译及GST-pulldown试验证实YB-1-p与hTRIP15发生相互作用.提示hTRIP15可通过与YB-1相互作用,参与调控MHCII及TSH受体等甲状腺细胞重要基因表达.
【关键词】 Y盒结合蛋白-(YB-) hTRIP 酵母双杂交文库筛选 GSTpulldown试验
【基金】国家自然科学基金资助项目(39970370)
【分类号】Q781
甲状腺素受体相互作用蛋白15(TRinteract-ingprotein15,)是新近克隆的重要的核蛋白基因[1].经用酵母双杂交技术研究hTRIP15与TR的相互作用[2].据认为一种核受体共调节子,常可与多转录因子相作用,如SMRT,NcoR等.故本文旨在用hTRIP15作为“诱饵”通过酵母双杂交文库筛选,以探讨
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摘 要：为探讨甲状腺素受体相互作用蛋白(hTRIP15)是否与其他核蛋白发生相互作用，以hTRIP15作为“诱饵”，用酵母双杂交技术筛选人肝cDNA文库，在高严格度选择培养基(SD-Trp-Leu-Ade-His)上长出的克隆773个，再经β-gal表达和PCR等技术进一步缩小范围，经Blastn搜寻最终显示2个重复克隆编码一种共调节辅因子—Y盒结合蛋白-1(YB-1)。将插入序列与全长YB-1比较发现进入ORF内320bp，插入序列编码82aa，该蛋白称为YB-1-p，经蛋白体外翻译及GST-pulldown试验证实YB-1-p与hTRIP15可通过与YB-1相互作用，参与调控MHCⅡ及TSH受体等甲状腺细胞重要基因表达。
关键词：Y盒结合蛋白-1(YB-1)；hTRIP15；酵母双杂交文库筛选；GST pulldown 试验
中图分类号：Q758
文献标识码：A
文章编号：1007-7847(2005)01-0015-04
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