铁皮石斛cDNA文库的构建及分析
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方花 魏小勇 广州中医药大学护理学院 广州中医药大学基础医学院
【摘要】首次报道铁皮石斛cDNA文库的构建及其分析.以Trizol一步法从4年生的铁皮石斛叶片中提取总RNA,分离纯化mRNA,LD-PCR法反转录合成双链cDNA,以λTripEX2为载体,构建铁皮石斛cDNA文库.原始文库的滴度为4.3×105 pfu/mL,总克隆数为3.1×105,重组率为97.6%,扩增后文库总滴度为6.8×109pfu/mL,对随机挑取的噬菌斑进行PCR鉴定,结果插入片段多分布在0.5～2.0kb之间,绝大部分在1.2～1.7kb左右,文库质量鉴定结果表明,构建的铁皮石斛cDNA文库具有较好的库容量、较高的重组率以及较大的插入片段.cDNA文库的构建为铁皮石斛药用成分相关功
【关键词】 铁皮石斛 cDNA 文库构建
【基金】广东省中医药局资助项目(402003,303005)
【分类号】R282;
中药功能基因的研究逐渐成为中药现代化研究的一个热点,因为功能基因和次生代谢酶基因决定了有效成分的结构与功能,是中药现代化的关键环节之一犤1犦.在植物中药功能基因研究中,与基因组测序和ESTs测序相比,药用活性成分生物合成相关基因的研究更受到重视,克隆基因的数量呈上
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摘 要：首次报道铁皮石斛cDNA文库的构建及其分析.以Trizol一步法从4年生的铁皮石斛叶片中提取总RNA，分离纯化mRNA，LD-PCR法反转录合成双链cDNA，以入TripEX2为载体，构建铁皮石斜cDNA文库.原始文库的滴度为4.3×105pfu/mL， 总克隆数为3.1 ×105， 重组率为97.6%，扩增后文库总滴度为6.8×109pfu/mL，对随机挑取的噬菌斑进行PCR鉴定，结果插入片段多分布在0.5—2，0kb之间，绝大部分在1.2-1.7kb左右，文库质量鉴定结果表明，构建的铁皮石斛cDNA文库具有较好的库容量、较高的重组率以及较大的插入片段.cDNA丈库的构建为铁皮石斛药用成分相关功能基因的研究奠定了基础.
关键词：铁皮石斛；cDNA；文库构建
中图分类号：R282.5
文献标识码：A
文章编号：1007-7847(2005)03—0263—04
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