抑制VEGF基因表达对大肠癌细胞HT-29的增殖影响
小干扰RNA,血管内皮生长因子,基因治疗
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王宏伟 曹明智 张金玉 张峥 王秀丽 葛银林 青岛大学医学院附属医院检验科 青岛大学医学院附属医院肿瘤外科 青岛大学医学院生物化学与分子生物学教研室 青岛大学医学院生物化学与分子生物学教研室 青岛大学医学院生物化学与分子生物学教研室 青岛大学医学院生物化学与分子生物学教研室
【摘要】选择血管内皮生长因子(VEGF)基因为靶基因,设计两组针对VEGFmRNA的小干扰RNA,合成DNA寡核苷酸链,体外转录合成siRNA.以人大肠癌细胞系HT-29为靶细胞,应用脂质体转染的方法,将siRNA导入细胞.MTT法检测siRNA对细胞增殖率的影响,RT-PCR法比较转染前后VEGFmRNA表达水平的变化,ELISA法检测细胞培养液中VEGF蛋白分泌量的变化.结果表明,两组siRNA转染后均能有效地抑制HT-29细胞的生长,VEGFmRNA的表达量大幅度减少;相对应的VEGF蛋白水平也显著降低,而作为阴性对照的错义序列组siRNA转染后则无上述作用.
【关键词】 小干扰RNA HT- 血管内皮生长因子 基因治疗
【基金】青岛市科技局科技计划项目(03-1-YN-14)
【分类号】R735.34
大肠癌(colorectalcancer)是威胁人类生存的恶性肿瘤之一.在西方国家恶性肿瘤的发病率中居第2位,在我国居常见恶性肿瘤的第4位[1,2].肿瘤的基因治疗中抗血管生成疗法成为近年来较为引人注目的一种.肿瘤血管的形成受多种因子调节,其中最重要的是血管内皮细胞生长因子(vasculare
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摘 要：选择血管内皮生长因子(VEGF)基因为靶基因，设计两组针对VEGF mRNA的小干扰RNA，合成DNA寡核苷酸链，体外转录合成siRNA。以人大肠癌细胞系HT-29为靶细胞，应用脂质体转染的方法，将siRNA导入细胞。MTT法检测siRNA对细胞增殖率的影响，RT-PCR法比较转染前后VECF mRNA表达水平的变化，ELISA法检测细胞培养液中VEGF蛋白分泌量的变化。结果表明，两组siRNA转染后均能有效地抑制HT-29细胞的生长，VEGF mRNA的表达量大幅度减少；相对应的VEGF蛋白水平也显著降低，而作为阴性对照的错义序列组siRNA转染后则无上述作用。
关键词：小干扰RNA；HT-29；血管内皮生长因子；基因治疗
中图分类号：Q753；R392.11
文献标识码：A
文章编号：1007—7847(2005)04—0356—05
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