人-山羊异种核移植胚胎发育的初步研究
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摘 要：以体外分离培养的人胚胎成纤维细胞为核供体，经血清饥饿培养后，通过显微操作技术移入山羊去核卵母细胞中，采用化学方法激活重组胚。通过体外培养观察，2-细胞胚胎发育率可达51.33%，4-细胞发育率为31.42%，但发育至桑椹胚阶段的胚胎数目大大减少，仅为9.73%。虽然目前尚未能获得异种核移植囊胚，但实验结果说明山羊成熟卯母细胞可以支持人体细胞核完成重编程， 人-山羊异种体细胞核移植重组胚可在体外完成其早期发育。
关键词：异种核移植；人：山羊；卵母细胞
中图分类号：Q813；R329
文献标识码：A
文章编号：1007—7847(2006)01—0050—05
治疗性克隆(Therapeutic ccloning)是指以患者的体细胞作为供核，移入去核的卵母细胞内，将重构胚培育至囊胚，从内细胞团中分离出胚胎干细胞，为患者提供与其自身遗传物质一致的组织细胞或器官，用于患者疾病的治疗。目前，治疗性克隆存在的问题主要有：核移植总体效率很低、卵母细胞来源及质量不稳定、供核细胞种类的选择、操作水平、体外培养条件等。由于人类卵母细胞来源非常有限，且受到法律、伦理等多种因素的限制，很难获得足够数量的人卵母细胞用于实验研究，异种核移植技术的出现为解决这一难题提供了可能，目前已建立了使用兔卵母细胞的异种体细胞核移植胚胎干细胞，但胚胎发育率较低。本研究旨在对山羊成熟卵母细胞能否支持人体细胞核的重编程，并使重组胚获得一定程度的发育进行初步探索，以便为将来利用动物卵母细胞来获取治疗性克隆所需的胚胎干细胞奠定基础。
1 材料与方法
1.1 材料
1.1.1 胚胎组织
胎龄5-9周人工终止妊娠的废弃胚胎，要求胚体完整，无严重污染，废弃胚胎由解放军第四军医大学唐都医院妇产科提供.使用前征得患者同意，签署知情同意书，并获得学校医学伦理委员会的批准。
1.1.2 山羊卵巢
采集于陕西省西安市屠宰场.采集的卵巢置于20-30℃含0.32g/L硫酸庆大霉素的生理盐水中，6~8 h运回实验室。
1.1.3 主要试剂
DMEM培养液、M199培养液、SOF培养液、胎牛血清(FBS)购自GIBCO公司；二甲基亚砜(DMSO)、离子霉素(10nomycin)、6-二甲氨基嘌呤(6-DMAP)、Hoechst33342、细胞松弛素B(CCB)、透明质酸酶、胰蛋白酶、EDTA、聚乙烯吡咯酮(PVP)、矿物油购自Sigma公司；磷酸缓冲液(PBS)自配。
1.1，4 仪器设备
细胞培养箱(Heraus，西德)、实体显微镜(Olympus)、显微操作仪(Nikon) ......
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