重组人谷氧还蛋白1在大肠杆菌中表达条件的优化、纯化及活性检测
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刘莹莹 邹朝霞 周宏博 吴莉芳 房绍红 哈尔滨医科大学生物化学与分子生物学教研室 哈尔滨医科大学生物化学与分子生物学教研室 哈尔滨医科大学生物化学与分子生物学教研室 哈尔滨医科大学生物化学与分子生物学教研室 哈尔滨医科大学生物化学与分子生物学教研室
【摘要】为进一步研究谷氧还蛋白1(Grx1)的生物学功能及作用机制,将已构建的pRSETA-Grx1融合蛋白表达载体在大肠杆菌BL21(DE3)菌株中表达,并优化表达条件,用SDS-PAGE和凝胶影像分析.结果表明,当菌体密度OD600为1.0时开始诱导,加入终浓度0.5mmol/LIPTG,37℃,110±5r/min振荡培养5h,重组蛋白为可溶性,表达量达30%以上.用Ni-NTA树脂亲和层析纯化重组蛋白,获得蛋白质纯度达90%以上;W estern印迹结果表明,该蛋白具有免疫活性;MTT结果显示,终浓度为10mg/LGrx1重组蛋白具有保护细胞抵御500μmol/LH2O2作用(P0.01).
【关键词】 pRSETA-Grx 表达条件优化 纯化
【基金】黑龙江省自然科学基金(2004-05) 黑龙江省博士后启动基金资助项目 黑龙江省教育厅基金(10551142)
【分类号】Q78
谷氧还蛋白(G lutaredoxin,G rx),又称巯基转移酶,分子质量约为12kD,由106或107个氨基酸组成,是巯基—二硫键氧化还原酶家族的重要组分,通过催化G SH与蛋白质二硫键之间进行氧化还原反应,修复蛋白活性犤1犦.它最早由H olm-gren A于1976年发现犤2犦.现已发现它在细菌、病毒、
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摘 要：为进一步研究谷氧还蛋白1(Grx1)的生物学功能及作用机制，将已构建的pRSETA-Grx1融合蛋白表达栽体在大肠杆菌BL21(DE3)菌株中表达，并优化表达条件，用SDS-PAGE和凝胶影像分析。结果表明，当菌体密度OD600为1.0时开始诱导，加入终农度0.5 mmol/L IPTG，37℃，110±5 r/min振荡培养5 h，重组蛋白为可溶性，表达量达30%以上。用Ni-NTA树脂亲和层析纯化重组蛋白，获得蛋白质纯度达90%以上；Western印迹结果表明，该蛋白具有免疫活性；MTT结果显示，终浓度为10mg/L Grxl重组蛋白具有保护细胞抵御500μmol/L H2O2作用(P
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