小肽基因合成及其串联体表达载体的构建(2)
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参见附件(547KB，5页)。
将hegf基因克隆到pGAPZet-A，并转化大肠杆菌Top10F’，如2.2进行PCR、酶切鉴定及测序分析，结果显示已经成功构建了pGAPZα.hegf。
2.4 多拷贝表达载体构建结果
分别用Xho I/AvaⅢ和Xho I/Pst I双酶切pGAPZα-hegf，分别回收大片段和小片段，连接大、小片段，可获得pGAPZα-2 hegf；再用Xho I/AvaⅢ和Xho I/Pst I双酶切pGAPZet-2hegf,分别回收大片段和小片段，连接大、小片段，可获得pGAPZα-4hegf，连接第一次回收的大片段和第2次回收的小片段，或第一次回收的小片段和第2次回收的大片段，可得到pGAPZα-3hegf,经过双酶切鉴定(如图5)和表达载体测序分析，结果表明本研究已成功构建了pGAPZα-2begf(324 bp)、pGAPZα-3 hegf(483 bp)和pGAPZα-4 hegf(642bp)，为进一步进行基因表达及其生物学活性分析奠定了基础。
3 讨论
本研究运用套叠PCR合成hegf基因时，首先合成了3个片段，正链hegf1和hegf3、负链hegf2.hegf1和hegf2进行套叠PCR后形成hegf1-hegf2，但此回收产物不能直接与hegf3进行第2次套叠PCR，而是需要先用Klenow Frag-ment片段延伸hegt3后才能进行基因的连接 ......
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