RNA干扰VEGF对体外JAR细胞生长的影响(3)
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参见附件(613KB，6页)。
shVEGF2的重组pSUPER质粒及携空pSUPER质粒的JAR细胞株，经过RT-PCR检测，稳定转染pSUPER-shVEGF1、pSUPER-shVEGF2的JAR细胞株VEGF基因表达受到了有效抑制，pSU-PER-shVEGF1组达到了VEGF基因沉默的效果，而未载有shVEGF的空pSUPER转染组的细胞仍显示VEGF条带，与未转染的细胞相似.提示本实验构建的质粒能稳定抑制VEGF mRNA表达，且成功建立了稳定转染VEGF质粒的JAR细胞株.其机制据Brummelkamp的研究，pSUPER载体系统不仅在RNA干扰中作为siRNA的载体，还可以在哺乳动物细胞内，以自身载有的siRNA为模板，复制产生新的特异性的siRNA的正义链与反义链的前体，并由于其配对特性，快速合成为siR-NA，发挥强而持久的RNA干扰作用。
3.2 VEGF靶位点与RNA干扰效果
本实验在设计siRNA时，设计的序列为两组，shVEGF1序列的RNA干扰效果较好，而shVEGF2序列RNA干扰后，VEGF表达减少，但未被完全抑制，这可能和靶位置有关，这和Holen等的研究相似，Holent等发现在Hela细胞中，针对人凝血组织因子mRNA编码区设计的siRNA ......
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