大鼠胚胎后肾间充质细胞的分离、培养及鉴定
参见附件(445kb)。
焦玉清 易著文 何小解 刘喜红 何庆南 党西强 吴小川 莫双红 中南大学湘雅二医院小儿肾脏病研究室湖南省小儿肾脏病临床中心 中南大学湘雅二医院小儿肾脏病研究室湖南省小儿肾脏病临床中心 中南大学湘雅二医院小儿肾脏病研究室湖南省小儿肾脏病临床中心 中南大学湘雅二医院小儿肾脏病研究室湖南省小儿肾脏病临床中心 中南大学湘雅二医院小儿肾脏病研究室湖南省小儿肾脏病临床中心 中南大学湘雅二医院小儿肾脏病研究室湖南省小儿肾脏病临床中心 中南大学湘雅二医院小儿肾脏病研究室湖南省小儿肾脏病临床中心 中南大学湘雅二医院小儿肾脏病研究室湖南省小儿肾脏病临床中心
【摘要】分离、培养大鼠胚胎后肾间充质细胞(MMCS),取孕13d大鼠胚胎,分离胚胎肾脏,去除输尿管芽,消化后置37℃、5%CO2、饱和湿度的培养箱中培养.倒置相差显微镜下观察培养细胞,并行HE染色、电镜观察、生长曲线测定;ABC免疫酶染色法检测波形蛋白、角蛋白、nestin、CD133、CD34;直接免疫荧光法检测双花扁豆凝集素(Dolichos Biflorus,DB),并流式细胞术定量检测.MMCS形态为成纤维细胞样,贴壁生长,48～72h达生长高峰;波形蛋白、nestin、CD133表达阳性;角蛋白、CD34、DB表达阴性;MMCS以DB标记后流式细胞检测为单峰.结果表明:培养细胞为后肾间充质细胞,纯度较高并符合干细胞特征.
【关键词】 后肾 间充质细胞 原代培养 大鼠
【基金】国家自然科学基金资助项目(30672251)
【分类号】R329
研究显示,胚胎后肾间充质细胞(metanephricmesenchymal cells,MMCS)具有干细胞特性[1,2].诸多因素如WT-1、PAX-2、TGF-β等,在MMCS的增殖、分化过程中,发挥诱导作用[3].近年来的研究,着重于后肾原基及输尿管芽之间相互诱导的分子机制及基因学基础的探讨[4],而有关MMCS的体内
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摘要：分离、培养大鼠胚胎后肾间充质细胞(MMCS)，取孕13d大鼠胚胎，分离胚胎肾脏，去除输尿管芽，消化后置37℃、5%CO2、饱和湿度的培养箱中培养，倒置相差显微镜下观察培养细胞，并行HE染色、电镜观察、生长曲线测定：ABC免疫酶染色法检测波形蛋白、角蛋白、nestin、CD133、CD34；直接免疫荧光法检测双花扁豆凝集素(Dolichos Bmoms，DB)，并流式细胞术定量检测，MMCS形态为成纤维细胞样，贴壁生长，48～72h达生长高峰：波形蛋白、nestin、CD133表达阳性；角蛋白、CD34、DB表达阴性；MMCS以DB标记后流式细胞检测为单峰，结果表明：培养细胞为后肾间充质细胞，纯度较高并符合干细胞特征。
关键词：后肾；间充质细胞；原代培养；大鼠
中图分类号：R-332
文献标识码：A
文章编号：1007-7847(2008)01-0066-07
Isolation，Cultivation and Identification of Metanephric Mesenchymal Cells Derived from Embryonic Rats
注：本文中所涉及到的图表、注解、公式等内容请以PDF格式阅读原文
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【摘要】分离、培养大鼠胚胎后肾间充质细胞(MMCS),取孕13d大鼠胚胎,分离胚胎肾脏,去除输尿管芽,消化后置37℃、5%CO2、饱和湿度的培养箱中培养.倒置相差显微镜下观察培养细胞,并行HE染色、电镜观察、生长曲线测定;ABC免疫酶染色法检测波形蛋白、角蛋白、nestin、CD133、CD34;直接免疫荧光法检测双花扁豆凝集素(Dolichos Biflorus,DB),并流式细胞术定量检测.MMCS形态为成纤维细胞样,贴壁生长,48～72h达生长高峰;波形蛋白、nestin、CD133表达阳性;角蛋白、CD34、DB表达阴性;MMCS以DB标记后流式细胞检测为单峰.结果表明:培养细胞为后肾间充质细胞,纯度较高并符合干细胞特征.
【关键词】 后肾 间充质细胞 原代培养 大鼠
【基金】国家自然科学基金资助项目(30672251)
【分类号】R329
研究显示,胚胎后肾间充质细胞(metanephricmesenchymal cells,MMCS)具有干细胞特性[1,2].诸多因素如WT-1、PAX-2、TGF-β等,在MMCS的增殖、分化过程中,发挥诱导作用[3].近年来的研究,着重于后肾原基及输尿管芽之间相互诱导的分子机制及基因学基础的探讨[4],而有关MMCS的体内
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摘要：分离、培养大鼠胚胎后肾间充质细胞(MMCS)，取孕13d大鼠胚胎，分离胚胎肾脏，去除输尿管芽，消化后置37℃、5%CO2、饱和湿度的培养箱中培养，倒置相差显微镜下观察培养细胞，并行HE染色、电镜观察、生长曲线测定：ABC免疫酶染色法检测波形蛋白、角蛋白、nestin、CD133、CD34；直接免疫荧光法检测双花扁豆凝集素(Dolichos Bmoms，DB)，并流式细胞术定量检测，MMCS形态为成纤维细胞样，贴壁生长，48～72h达生长高峰：波形蛋白、nestin、CD133表达阳性；角蛋白、CD34、DB表达阴性；MMCS以DB标记后流式细胞检测为单峰，结果表明：培养细胞为后肾间充质细胞，纯度较高并符合干细胞特征。
关键词：后肾；间充质细胞；原代培养；大鼠
中图分类号：R-332
文献标识码：A
文章编号：1007-7847(2008)01-0066-07
Isolation，Cultivation and Identification of Metanephric Mesenchymal Cells Derived from Embryonic Rats
注：本文中所涉及到的图表、注解、公式等内容请以PDF格式阅读原文
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