多顺反子慢病毒载体介导编码基因在人胚胎干细胞中的表达
内部核糖体进入位点,裂解因子A,甲基转移酶
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李慧 李威 王倩 宋和存 郭毅 中国医科大学附属一院妇科;中国医科大学附属一院检验科;
【摘要】人胚胎干细胞的基因修饰对于干细胞在体外的调控及促进干细胞在治疗方面的应用具有很高价值.探讨了以艾滋病病毒-1为基础的慢病毒载体转导人胚胎干细胞,表达2种或3种转移基因的可行性和功效.应用脑心肌炎病毒的内部核糖体进入位点(IRES)序列和/或口蹄疫病毒(FMDV)裂解因子2A构建双顺反子和三顺反子慢病毒载体,绿色荧光蛋白(eGFP)和O6-甲基鸟嘌呤-DNA-甲基转移酶作为检测基因,抗嘌呤基因(嘌呤-N-甲基转移酶;PAC)作为选择基因,转染人胚胎干细胞后经过嘌呤选择.通过流式细胞技术和蛋白印迹杂交方法检测eGFP和MGMT的表达.多基因慢病毒载体可以同时将2或3个基因转移到人胚胎干细胞.多顺反子慢病毒载体转导人胚胎干细胞后经过嘌呤选择,可以使转移基因高效、均匀的表达,在人胚胎干细胞的基础和应用研究方面具有重要意义.
【关键词】 人胚胎干细胞 慢病毒载体 内部核糖体进入位点 裂解因子A 甲基转移酶
【基金】教育部留学归国人员科研课题 辽宁省教育厅科研课题资助项目(2004F036)
【分类号】R346
胚胎干细胞是从早期胚胎中发现的一种能在体外培养的未分化细胞,具有高度分化潜能,是从着床前早期囊胚内细胞团分离出来的多能干细胞,能在体外长期不断自我更新,并保持多向分化潜能,可以分化成内、中、外几乎所有类型的细胞[1~3].干细胞的定向分化可望在基因研究、药物开发、
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摘要：人胚胎干细胞的基因修饰对于干细胞在体外的调控及促进干细胞在治疗方面的应用具有很高价值.探讨了以艾滋病病毒-1为基础的慢病毒栽体转导人胚胎干细胞，表达2种或3种转移基因的可行性和功效。应用脑心肌炎病毒的内部核糖体进入住点(IRES)序列和，或口蹄疫病毒(FMDV)裂解因子2A构建双顺反子和三顺反子慢病毒载体，绿色荧光蛋白(eGFP)和06-甲基鸟嘌呤-DNA.甲基转移酶作为检测基因.抗嘌呤基因(嘌呤-N-甲基转移酶；PAC)作为选择基因，转染人胚胎干细胞后经过嘌呤选择.通过流式细胞技术和蛋白印迹杂交方法检测eGFP和MGMT的表达.多基因慢病毒栽体可以同时将2或3个基因转移到人胚胎干细胞.多顺反子慢病毒栽体转导人胚胎干细胞后经过嘌呤选择，可以使转移基因高效、均匀的表达。在人胚胎干细胞的基础和应用研究方面具有重要意义。
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