连接酶介导的诱导荧光共振能量转移法检测基因点突变
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2009年12月1日
SYBR,Green,I,地中海贫血遗传病,点突变检测,核酸探针,聚丙烯酰胺凝胶电泳,连接反应,荧光强度
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孟祥贤 黄建华 谭拥军 湖南大学生物医学工程中心 化学生物传感与计量学国家重点实验室;
【摘要】发展了一种基于连接酶介导的诱导荧光共振能量转移技术用于基因点突变的准确快速检测方法.针对特定突变位点设计的核酸探针,当与模板之间完全匹配时,被连接形成一条长的双链,双链特异性嵌入荧光染料SYBR Green I插入新生的双链区域,诱导荧光共振能量转移发生.相反,核酸探针与模板之间不匹配,则不能诱导荧光共振能量转移的出现.利用该方法,成功实现了β地中海贫血遗传病两种普遍存在的点突变Ivs-2-654(C→T)和CD17(A→T)的基因型检测.
【关键词】 连接酶 诱导荧光共振能量转移 SYBR Green I 地中海贫血遗传病 基因点突变 点突变检测 核酸探针 聚丙烯酰胺凝胶电泳 连接反应 荧光强度
【基金】国家自然科学基金资助项目(20505007) 湖南省科技计划资助项目(2008SK3085)
【分类号】R450
许多疾病的发生发展与单个碱基的突变密切相关.快速准确检测这些碱基变异对疾病的预防、临床检测和分子诊断有重大意义[1~3].随着对点突变研究的广泛关注,其检测技术得到了快速的发展.传统检测方法[4]是用凝胶电泳、放射性元素标记与自显影方法相结合,它们复杂繁琐又耗时.一
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摘要：发展了一种基于连接酶介导的诱导荧光共振能量转移技术用于基因点突变的准确快速检测方法，针对特定突变位，最设计的核酸探针，当与模板之间完全匹配时，被连接形成一条长的双链，双链特异性嵌入荧光染料SYBR Green Ⅰ插入新生的双链区域，诱导荧光共振能量转移发生，相反，核酸探针与模板之间不匹配，则不能诱导荧光共振能量转移的出现，利用该方法，成功实现了口地中海贫血遗传病两种普遍存在的点突变Ivs-2-654(C→T)和CD17(A→T)的基因型检测。
关键词：连接酶；诱导荧光共振能量转移；SYBR Green Ⅰ；地中海贫血遗传病
中图分类号：Q319.31 文献标识码：A 文章编号：1007-7847(2009)04-0283-05
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