Flag标签MORC2-677丝氨酸位点突变载体构建及表达
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2012年1月1日
突变体,真核表达载体,基因表达,胃癌细胞
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王桂玲 王孝会 程正国 宋艳艳 李丰 中国医科大学基础医学院细胞生物学教研室教育部细胞生物学重点实验室;
【摘要】构建Flag标签pcDNA3.1-MORC2的677丝氨酸位点突变重组质粒并完成在SGC-7901细胞中表达,更好地研究677丝氨酸位点所发生的功能.首先,构建含有KpnⅠ和XhoⅠ酶切位点Flag标签的pcDNA3.1空载体;再以含有KpnⅠ和XhoⅠ酶切位点的pcDNA3.1A-MORC2-WT野生型质粒为模板,在S677突变位点两侧设计重叠突变引物,进行三轮重叠延伸PCR完成定点突变,获得MORC2全长编码序列的S677位点的定点突变体载体(pcDNA3.1A-MORC2-S677A/S677E);再通过KpnⅠ和XhoⅠ酶切把pcDNA3.1A-MORC2-WT/S677A/S677E各载体定向克隆到已构建好的pcDNA3.1-Flag空载体中,酶切鉴定及测序正确后,转染到SGC-7901细胞中,利用Flag–标签抗体,Western blot检测其各突变载体的表达.成功构建了人Flag标签MORC2全长编码序列S677位点突变体真核表达载体并在SGC-7901细胞中获得带Flag标签融合蛋白表达产物,为进一步研究MORC2的功能奠定了基础.
【关键词】 MORC 突变体 真核表达载体 基因表达 胃癌细胞
【基金】国家自然科学基金资助项目(30871294) 辽宁省自然科学基金资助项目(201102277)
【分类号】Q78
人MORC2(microrchidia family CW-type zinc-finger 2)为MORC家族的一个成员.MORC蛋白家族都含有保守的ATP酶结构域(ATPase do-main)、CW(半胱氨酸-色氨酸)型锌指结构域、核定位信号(nuclear localization signal,NLS)及线圈结构域(coiled-coil domain)[1～4].预测在人类中含
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