水稻甲基结合蛋白基因MBD701的克隆及原核表达
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2012年2月1日
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张艳霞 贾海英 司志飞 刘昊英 孟凡荣 河南农业大学生命科学学院;
【摘要】甲基结合域蛋白MBD作为与甲基化位点特异结合的重要反式作用因子,在植物生长发育中发挥着重要的调控作用.为了探讨MBD基因的结构与功能,利用RT-PCR方法克隆了水稻中编码甲基结合蛋白基因MBD701,构建了MBD701的原核表达载体pGEX-MBD701,并在大肠杆菌BL21(DE3)工程菌株中实现了融合蛋白GST-MBD701的表达.结果表明,MBD701除了包含典型的甲基结合域(第138～212)外,还包含CW的锌指结构(第73～132);在37℃,1 mmol/L IPTG浓度条件下成功诱导表达了大小为65.87 kD的GST-MBD701融合蛋白,这为进一步开展MBD701的蛋白纯化和功能分析奠定了基础.
【关键词】 水稻 甲基结合蛋白 基因克隆 原核表达
【基金】国家自然科学基金资助项目(30300195)
【分类号】S511;Q943.2
DNA甲基化是生物体内普遍存在的一种基因修饰现象.植物基因组中DNA甲基化一般发生在mCpG、mCpNpG和mCpNpN(N=A,C或T)上[1~3].研究表明,启动子及编码区域DNA甲基化或脱甲基化可以抑制或激活基因的转录,甲基结合蛋白(Methyl-binding domain protein,MBD)是与甲基化DNA特异结合
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