金黄色葡萄球菌甲氧西林耐药辅助基因femB的克隆和原核表达
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2012年3月1日
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邹明祥 武文君 李军 邬国军 张宁洁 刘文恩 范学工 中南大学湘雅医院检验科;河南中医学院第一附属医院检验科;中南大学基础医学院微生物学系;中南大学湘雅医院感染病科;
【摘要】金黄色葡萄球菌femB基因与甲氧西林高水平耐药密切相关,可能成为开发抗MRSA药物的新靶位.以金葡菌基因组DNA为模板,PCR扩增femB全长基因,所得片段与pGM-T载体连接并转化感受态大肠杆菌DH5α,阳性克隆以PCR、双酶切及测序鉴定.将鉴定正确的目的片段定向克隆到pGEX-4T-1表达载体中,转化至大肠杆菌BL21后经IPTG诱导表达GST/FemB融合蛋白;采用SDS-PAGE及Western blot对融合蛋白进行鉴定.结果显示,重组质粒在宿主菌中获得了高效表达,融合蛋白相对分子质量为75 kD,该融合蛋白可与抗GST-tag抗体特异结合;表明femB基因的原核表达系统构建成功,为进一步研究其生物学功能奠定了基础.
【关键词】 金黄色葡萄球菌 femB基因 基因克隆 融合蛋白
【基金】湖南省自然科学基金资助项目(10JJ5027) 中南大学本科生自由探索研究创新基金资助项目(2010112001166)
【分类号】R440
金黄色葡萄球菌(以下简称金葡菌)是医院和社区获得性感染的重要病原菌,随着抗菌药物的广泛应用,其耐药现象日趋严重[1～3].其中,耐甲氧西林金葡菌(MRSA)不仅分离率高,而且由于具有独特的耐药机制使得所有β-内酰胺类药物临床治疗无效,是目前临床上严重的耐药问题[4,5].因而,
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