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编号:12432814
胰蛋白酶消化法和组织块法原代培养人包皮成纤维细胞的比较
http://www.100md.com 2012年3月1日
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    参见附件。

    王志强 梁锐 陈明清 邓俊 李文亮 陈天星 文政琦 杨军 昆明医科大学第一附属医院肿瘤科;云南省第一人民医院病理科;昆明医科大学第一附属医院男性科;

    【摘要】小鼠胚胎成纤维细胞(MEFs)是目前国际上公认的人胚胎干细胞(hESCs)体外培养的饲养层细胞,但MEFs存在寿命短、动物源性污染等问题,需要探索适于hESCs体外培养且寿命长的人源性饲养层.采用胰蛋白酶消化法和组织块法分别原代培养人包皮成纤维细胞(hFFs),探索hFFs原代培养的最佳方法,为hFFs作为饲养层在hESCs研究中的应用提供可靠的科学依据;通过倒置显微镜下观察其生长状态和免疫细胞化学染色鉴定,结果显示两种原代培养方法获得的hFFs的形态及生物学特性均符合成纤维细胞;通过测定细胞生长曲线及MTT法检测,结果显示两种原代培养方法获得的不同代数的hFFs均具有较高的增殖活性,传代10余代仍能保持较好的细胞形态,可以制备成饲养层用于hESCs的研究.

    【关键词】 人包皮成纤维细胞 原代培养 胰蛋白酶消化法 组织块法 饲养层 人胚胎干细胞

    【分类号】R329.2

    20世纪末和21世纪初是生命科学发展最为迅猛的时代,而干细胞的研究与应用已成为生命科学中最令人瞩目的领域之一[1].胚胎干细胞(embr-yonic stem cells,ESCs)具有强大的多向分化潜能和自我更新的能力,在体内或体外可以分化为成体3个胚层几乎所有类型的组织细胞,为研究胚胎发

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