脑胶质瘤IDH1基因突变HRM检测方法的初步建立
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2013年5月1日
异柠檬酸脱氢酶基因突变,高分辨率熔解曲线,胶质瘤检测
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参见附件。
王银辉 张海燕 杨传红 张伟 赖晃文 陈晓东 王捷 华南理工大学生物科学与工程学院;广州军区广州总医院医学实验科;广州军区广州总医院病理科;
【摘要】在大多数弥漫性人脑胶质瘤中常伴随着异柠檬酸脱氢酶基因(isocitrate dehydrogenase gene)1(IDH1)的突变.有着此突变的胶质瘤患者在临床上有良好的预后效果,因此可以作为胶质瘤患者的分子标记.通过提取石蜡切片中的胶质瘤组织DNA,优化条件以初步建立IDH1基因突变高分辨率熔解曲线分析法(high resolution melting,HRM)检测方法.用HRM对胶质瘤石蜡包埋组织标本中IDH1基因检测突变,并用直接测序法对比,观察反应体系和反应条件的可行性.正交试验结果证明引物最适退火温度为53℃,20μL HRM反应体系中,0.6μmol/L引物,2.5 mmol/L Mg2+,60 ng DNA模板为最佳.HRM IDH1基因突变的结果和直接测序法结果一致,但灵敏度更高.说明此HRM方法简单,特异性强,准确可靠,可为IDH1突变检测的临床应用提供借鉴依据.
【关键词】 异柠檬酸脱氢酶基因突变 高分辨率熔解曲线 胶质瘤检测
【分类号】R739.4
异柠檬酸脱氢酶(isocitrate dehydrogenase)IDH基因定位于2q33.3,全长18 841 bp,含10个外显子和9个内含子,编码的异柠檬酸脱氢酶参与TCA循环,催化异柠檬酸生成α-酮戊二酸,与细胞缺氧诱导因子(HIF)稳定性相关,而HIF表达参与肿瘤不同的恶性行为[1].IDH1突变改变了异柠檬酸脱氢
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