转化生长因子β信号转导通路的生物传感器的构建
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2013年5月1日
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何建伟 刘伟 曹薇薇 何建勋 程江 史晨辉 石河子大学医学院第一附属医院检验科;石河子大学医学院民族与地方病教育部重点实验室;石河子大学医学院第一附属医院康复科;石河子大学医学院第一附属医院骨一科;
【摘要】为构建转化生长因子β信号转导通路的下游蛋白Smad3的生物传感器,根据已发表的人类Smad3基因序列设计引物,利用PCR扩增得到了一个长度约为1.3 kb的Smad3基因全长序列.序列分析结果表明与数据库公布的人类序列(Genebank登录号:NM_005902.3)一致.通过基因工程的方法,构建含有增强的青色荧光蛋白-Smad3-黄色荧光蛋白变体(ECFP-Smad3-Citrine)融合蛋白的真核表达载体即:Smad3生物传感器.转染293T细胞并观察转染效率和融合蛋白表达情况.在荧光显微镜下,应用MetaFlour FRET 4.6软件测量Smad3生物传感器的荧光能量共振转移(flurorescence resonance energy transfer,FRET).经过PCR和双酶切鉴定结果表明:成功构建Smad3生物传感器质粒.细胞转染后转染效率达40%,并检测到FRET现象.分析表明:Smad3生物传感器能够作为活细胞分子探针研究转化生长因子β信号转导通路.
【关键词】 转化生长因子β 生物传感器 构建
【分类号】R346
转化生长因子β(transforming growth factorβ,TGFβ)是一种体内分布广泛而且具有多效性的细胞因子,调控着细胞的增殖、分化、凋亡、细胞迁移、蛋白合成和上皮细胞间质化转变等多种病理和生理过程[1].TGFβ与跨膜受体结合后调控靶基因表达是通过一系列Smad蛋白介导的.Smad3
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