1α-L-鼠李糖苷酶的分子生物学研究

    微生物分泌的α-L-鼠李糖苷酶是一种诱导酶，需要诱导物柚皮苷、橙皮苷、鼠李糖等存在时才能合成α-L-鼠李糖苷酶，而且微生物中α-L-鼠李糖苷酶的诱导受到碳源代谢调节，给微生物发酵产α-L-鼠李糖苷酶造成阻碍。同时随着α-L-鼠李糖苷酶的应用越来越广泛，传统发酵的生产方式不能满足日益增长的需求，也很难达到很高的纯度。因此，选择现代生物技术来研究α-L-鼠李糖苷酶是一种必然趋势

    1.1α-L-鼠李糖苷酶基因的克隆

    早期对a-L-鼠李糖苷酶的研究主要是该酶的分离纯化及酶学性质，2000年后对α-L-鼠李糖苷酶基因克隆的研究日渐增多，表1列举了2000年以来微生物中GH78家族和近两年其他家族已克隆的α-L-鼠李糖苷酶基因目前，从微生物中克隆α-L-鼠李糖苷酶基因主要采用PCR和构建文库的方法。据PuriM等报道，采用构建文库的方法克隆α-L-鼠李糖苷酶基因可以通过以下两种方法筛选阳性克隆；一种是利用pNPR作为底物筛选含有α-L-鼠李糖苷酶活性的阳性克隆；另外一种是采用多克隆抗体筛选产鼠李糖苷酶的阳性克隆。

    细菌来源的α-L-鼠李糖苷酶基因的克隆研究比真菌稍早，在2000年[18]就有学者报道对Clostridium.stercorarium菌株中鼠李糖苷酶基因ramA的克隆。有些细菌中存在多个编码α-L-鼠李糖苷酶的基因 ......