HPLC法测定千柏鼻炎片中决明子的含量
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2010年3月1日
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【摘要】:目的:建立千柏鼻炎片中决明子的含量测定方法。方法:采用高效液相色谱法,用Phenomenex C18色谱柱(250mm×4.6mm,4μm),以甲醇-0.1%磷酸溶液(用三乙胺调PH值至3.5)(17:3)为流动相,流速:1.0ml.min-1,检测波长:254nm;柱温为30℃。结果:该方法线性关系良好;该组分平均加样回收率为97.90%;RSD为0.71%(n=6)。结论:本方法操作简便、结果准确、分离效果好,可用于该制剂的质量控制。
【关键词】:千柏鼻炎片;大黄酚;决明子;高效液相色谱法
【中图分类号】R927.1【文献标识码】A【文章编号】1007-8517(2010)06-012-1
千柏鼻炎片由千里光、卷柏、决明子、羌活、麻黄、川芎、白芷七味中药组成,具清热解毒,活血祛风,宣肺通窍。用于风热犯肺,内郁化火,凝滞气血所致的鼻塞,流涕黄稠;急慢性鼻炎,急慢性鼻窦炎见上述证候者。[1]方中主药决明子具有清热明目、润肠通便等作用。其主要活性成分蒽醌类衍生物具降压、调血脂、抗菌、保肝等药理作用。[2]为了有效控制药品质量,本实验建立了以大黄酚为目标成分,通过高效液相色谱法测定其含量而确定制剂中决明子含量的方法。
1仪器与试药
1.1仪器Agilent1100系列高效液相色谱仪(包括四元梯度泵;紫外检测器;LC1100化学工作站);BP211D电子分析天平(Sartorius)。
1.2试药大黄酚(中国药品生物制品检定所,批号为110796-200514)甲醇为色谱纯;其它试剂均为分析纯;超纯水;千柏鼻炎片(市售,产地分别为陕西、广东、成都)。
2方法与结果
2.1色谱条件色谱柱为Phenomenex C18柱(4.6mm×250mm;4um);流动相:甲醇—0.1%磷酸溶液(用三乙胺调PH值至3.5)(17:3);检测波长254nm;柱温为30℃;流速:1.0mL/min;进样量10ul。理论板数按大黄酚计算,应不低于3000。
2.2对照品溶液制备精密称取大黄酚对照品(五氧化二磷减压干燥器中干燥12h)10.34mg;置50ml量瓶中,加无水乙醇-乙酸乙酯(2:1)至刻度;摇匀,精密量取大黄酚对照品溶液5ml置50ml量瓶中加无水乙醇-乙酸乙酯(2:1)稀释至刻度,即得。
2.3供试品溶液制备取千柏鼻炎片10片,除去包衣,研细,取1g,精密称定,置具塞锥形瓶中,精密加入甲醇50ml,称定重量,置水浴上加热回流30分钟,放冷,再称定重量,用甲醇补足减失的重量,摇匀,滤过。精密量取续滤液25ml,蒸干,加10%盐酸溶液30ml,置水浴中加热水解1小时,立即冷却,用三氯甲烷摇摇提取4次,每次30ml,合并三氯甲烷液,回收溶剂至干,残渣用无水乙醇-乙酸乙酯(2:1)溶解,转移至10ml量瓶中,并稀释至刻度,摇匀,滤过,取续滤液,作为供试品溶液。
2.4线性关系考察分别精密吸取稀释前大黄酚对照品溶液0.25、0.5、1.0、2.0、3.0、4.0ml置10 mL量瓶中,加无水乙醇-乙酸乙酯(2:1)稀释至刻度,摇匀,得对照品系列浓度溶液,系列浓度分别为5.17、10.34、20.68、41.36、62.04、82.72µg/ml。按“2.1”色谱条件进行测定,每次进样10ul,记录色谱峰峰面积,以质量浓度为横坐标,峰面积积分值为纵坐标,进行线性回归,得标准曲线方程。A=32.67C+421.82、r=0.9991,结果表明大黄酚浓度在5.17～62.04µg/ml范围内线性关系良好。
2.5空白干扰实验按处方比例和制法(中国药典2005年版一部)自制缺决明子的样品,按供试品溶液的制法制成空白对照溶液,依法进样测定,结果空白对照溶液在大黄酚对照品保留时间处无色谱峰出现;表明在该实验条件下,其他药材成分对测定无干扰。
2.6精密度实验取实验用对照品溶液,依法连续重复进样5次,测定大黄酚的峰面积,计算得其RSD为0.37%。
2.7重复性实验取同一批样品,精密称取5份,按上述测定方法进行提取、制成供试品溶液,分别进样测定,记录大黄酚色谱峰面积,计算含量。结果该组分的RSD为0.93%。
2.8稳定性实验取同一供试品溶液每3h进样1次,共测定5次,计算大黄酚含量。测得的结果RSD为0.73%,说明供试品溶液在12h内基本无变化。
2.9加样回收率实验精密称取已知含量的样品(产地:陕西,批号090417)1g,共6份,分别精密加入一定量的大黄酚对照品,按“2.3”提取制成供试品溶液,依法测定含量,计算平均回收率,结果见表l。
表1 加样回收率实验结果(平均片重:0.3126g)
样品量 样品含量 加入对照 测得量 回收率
(mg) 品量(mg) (mg)(%)
1.0042 0.69320.41361.1014 98.69
1.0008 0.69080.41361.0948 97.68
0.9981 0.68900.41361.0894 96.81
1.0075 0.69540.41361.1028 98.50
1.0058 0.69430.41361.1003 98.16
1.0083 0.69600.41361 ......
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