纳米微球增强免疫比浊法测定α1-微球蛋白研究
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2010年3月1日
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【摘要】:α1-微球蛋白(α1-MG)是一种糖蛋白,主要在肝脏和淋巴组织中合成,广泛分布于体液及淋巴细胞膜表面.在血液中,α1-MG有游离和与IgA结合合两种形式,在正常情况下,血液中清中游离的α1-MG白可自由通过肾小球滤过,并在近曲小管被重吸收,而尿液中含量极微。因此,尿α1-MG含量升高,主要反映近曲小管的受损及受损程度,是一项早期和灵敏反映肾功能的指标,能早期反映肾功能的下降。因此,尿α1-微球蛋白水平能敏感的反映肾小管间质损害的程度,可作为早期诊断的灵敏指标,而α1-MG也是近曲小管损害的标志蛋蛋白。
【关键词】:纳米微球;α1-微球蛋白
【中图分类号】R917【文献标识码】A【文章编号】1007-8517(2010)06-055-1
1材料
1.1原理样品中α1-MG与试剂中相应的抗体在溶液中相遇,立即形成抗原-抗体复合物,并形成一定浊度。该浊度的高低在一定量抗体存在时与抗原的含量成正比。通过与同样处理的校准液比较,计算未知样品中的α1-微球蛋白含量。
1.2试剂Good’S缓冲液、微球藕合α1-MG抗体、稳定剂、表面活性剂以及质控品等。
1.3仪器采用Hitachi 7080全自动生化分析仪。
1.4方法将24mg/L校准品按倍比稀释为12,6,3,0mg/L作5点定标。基本测定参数:主波长600nm,副波长800nm,试剂1(R1):240μl;试剂2(R2):60μl。加入R1试剂5min后加入R2试剂,反应时间5min。
2结果
2.1精密度评价[1]按NCCLS评价方案,取低、中、高三个不同浓度的血清样本,α1-MG浓度分别为5.5mg/L、27.4mg/L、105mg/L,连续测定20次,再每天测1次,共测20d,结果见表1
2.2线性范围评价[2]按NCCLS的评价方案,用α1-MG浓度为110mg/L和10mg/L的高低值样本2份,然后2份样本等量混合产生中间值60mg/L,中间值再与高、低值等量混合,产生85mg/L和35mg/L的5个不同梯度值α1-MG样本,在仪器上以低值到高值和高值到低值分别测定,求得两次平均值,以X作为理论值,Y作为测定值进行回归分析,其方程y=0.9857x+1.1714,R2=0.9996。表明α1-MG浓度在110mg/L范围内,线性良好。
2.3比对实验取α1-MG浓度从50～110mg/L的新鲜血清标本50份,分别用本试剂与进口试剂同时测定α1-微球蛋白浓度,所得数据均按NCCLS文件统计,经t检验得P>0.05,R2=0.9996,表明本试剂与进口试剂高度相关。
2.4回收实验取低值和高值新鲜血清各1份(6 mg/L、33 mg/L),以不同比例混合,结果可见本法测定血清α1-MG的平均回收率为99%。
2.5干扰试验取4份高值α1-MG混合样品,分别加入干扰物类风湿因子、胆红素、甘油三酯、Hb,使其终浓度如表3。结果表明RF≤ 1200IU/L、BIL≤ 420μmol/L、TG≤10.0mmol/L、Hb≤4.0 g/L时对本法无干扰。
3讨论
α1-MG与β2-微球蛋白(β2-MG)、视黄醇结合蛋白(RBP)均为低分子量蛋白质(LMWP),是反映糖尿病肾病(DN)肾小管早期损害的良好指标,尿α1-微球蛋白测定较少受尿液pH值变动的影响,在酸性尿中更为稳定,尿中的浓度也远远高于其他LWMP,目前已成为LMWP中的首选指标[3]。临床常用放射免疫方法测定α1-MG含量,存在着放射性辐射和标记物放射衰变以及需时长,操作繁琐等缺点。本文采用增强免疫比浊法测定尿α1-微球蛋白浓度,并对其产品性能进行了初步方法学评价,旨在为检测尿α1-MG及早诊断及监控肾病提供一种简便、快速、准确的方法学依据 ......
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