HPLC法测定藏药榜嘎中阿替新\异叶乌头碱的含量
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【摘要】目的:测定四批藏药榜嘎中的阿替新、异叶乌头碱含量。方法:采用HPLC法,用DiamonsilC18柱(5μm,150mm×4.6mm),以甲醇-水-氯仿-三乙胺(70:30:2:0.1)洗脱,流速1ml/min,柱温30℃,检测波长230nm。结果:在1µg～5µg间,阿替新与异叶乌头碱均呈良好的线性关系,平均回收率为99.238%,RSD值1.477%。结论:该方法简便、准确、重复性好,可用于藏药榜嘎中阿替新、异叶乌头碱的含量测定。
【关键词】榜嘎;阿替新;异叶乌头碱;HPLC
【中图分类号】R29【文献标识码】A【文章编号】1007-8517(2010)10-188-2
榜嘎是常用藏药,为毛茛科植物船盔乌头Aconitum naviculare(Brahl.)Stapf及甘青乌头Aconitum tanguticum(Maxim.)的全草。主要分布于西藏南部,陕西秦岭、甘肃南部、青海东部、四川西部,云南北部等地也有出产。功效清热解毒利湿,主治肝炎、胆囊炎、肺炎、感冒发热、咽喉炎、胃肠炎等。榜嘎主要含有生物碱类成分,本研究测定了其中的阿替新、异叶乌头碱含量。
1实验部分
1.1仪器、试药和药品
Thermo高效液相色谱仪(Finigan公司),PDA检测器,甲醇为色谱纯,水为高纯水,其他试剂均为分析纯,阿替新、异叶乌头碱对照品由SIGMA公司提供。榜嘎药材四批,分别购自四川省阿坝州马尔康、红原、黑水及阿坝四县。
1.2色谱条件[1]和系统适用性试验
(A)
(B)
(C)
图1.阿替新和异叶乌头碱对照品溶液色谱图(A),榜嘎样品溶液色谱图(B),和空白溶液色谱图(C),(1.阿替新,2.异叶乌头碱)
用Diamonsil C18柱(5μm,150mm×4.6mm),以甲醇-水-氯仿-三乙胺(70:30:2:0.1)洗脱,流速1ml/min,柱温30℃,检测波长230nm,按阿替新计,色谱柱理论塔板数不低于6×103,阿替新峰和异叶乌头碱峰与其他峰达到基线分离,峰形对称。色谱图见图1。
1.3溶液的制备
1.3.1对照品溶液的制备精密称取阿替新、异叶乌头碱适量,加二氯甲烷制成浓度为1mg/ml的溶液,精密吸取1ml,置于尖底具塞试管中,精密加入0.01mol/l硫酸溶液1ml,涡旋2min,离心5min,取上清液,即得。
1.3.2样品溶液的制备取粉末10g,加入25%氨水6ml润湿,再加入乙醚50ml,放置过夜,过滤,药渣用乙醚洗涤三次,每次15ml,合并乙醚液,在60℃以下挥干,残渣用二氯甲烷溶解并定量转移至5ml容量瓶中。色谱检测前按1.3.1处理此溶液并进样。
1.4方法学考察
1.4.1线性范围精密吸取上述阿替新和异叶乌头碱对照品溶液2、4、6、8、10µl注入液相色谱仪,观察色谱图,记录其峰面积,并以峰面积A为纵坐标,进样量C(µg)为横坐标,进行回归,阿替新进样量在1µg～5µg间线性关系良好,A=38345C-1354.1(r=0.9999);异叶乌头碱进样量在1µg～5µg间线性关系良好,A=32069C-39.6(r=0.9999)。
1.4.2精密度试验精密吸取阿替新对照品溶液5µl,连续进样6次,阿替新峰面积的RSD为0.21%,表明仪器精密度良好。
1.4.3重复性试验取榜嘎粉末5份,分别按1.3.2项下方法制成样品溶液,以1.2项下色谱条件,精密吸取5µl注入液相色谱仪,记录峰面积,计算阿替新含量,结果阿替新平均含量0.106%,RSD为1.45%,表明该方法重复性良好。
1.4.4稳定性试验取样品溶液,分别在0、1、2、4、6、8小时,精密吸取5µl注入液相色谱仪,记录峰面积,结果RSD为1.73%,表明样品溶液在8小时内稳定。
1.4.5加样回收率试验称取已知含量的榜嘎粉末5份,每份约0.1g,精密称定,分别加入一定量的对照品,按上述重
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复性方法测定阿替新含量,计算加样回收率,结果见表1 ......
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