噬菌体生物扩增法检测肺泡灌洗液结核分枝杆菌的临床研究(2)
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2010年8月1日
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本研究用噬菌体生物扩增法、荧光涂片法、聚合酶链反应技术、罗氏培养法共4种方法同时检测不同的纤支镜肺泡灌洗液标本80份。PhaB法、荧光涂片法、PCR检测法、罗氏培养法阳性检出率分别为58.8%,47.5%,65%,76.3%。PhaB法和荧光涂片法阳性率比较,差异有显著性意义(X2=4.27,P<0.05),说明PhaB法比荧光涂片法有更高的敏感性。国内未见有相关文献报道。PhaB法和PCR检测法阳性检出率比较无显著性差异(X2=1.78,P>0.05);噬菌体生物扩增法以罗氏培养法为金标准,结果提示其敏感性77%,特异性100%,阳性预测值100%,阴性预测值57.6%。和国外以痰标本PhaB法检测报道结果相似[4]。联合PhaB法和荧光涂片法检测敏感性为81.2%,特异性为100%,阳性预测值100%,阴性预测值57.6%;联合PhaB法和PCR检测法检测敏感性为88.5%,特异性为89.5%,阳性预测值96.3%,阴性预测值89.5%。提示联合PhaB法和PCR检测法,能快速诊断肺结核,有较高的敏感性和特异性,在临床中可能有较大的实用价值。这有待于更大的标本量进一步验证。
结核分枝杆菌细菌学检测是诊断结核的金标准之一,但患者排菌情况受结核病发现时期较大影响,对早期以渗出、增殖为主的病理改变,排菌量较小;而发生坏死,空洞形成的患者相对排菌量较大。同时病灶相连的支气管引流是否通畅也影响远端气管内分泌物的排出,影响到痰结核菌的检查。本组病例肺泡灌洗液标本PhaB法阳性检测率较高,除了与病例的选择有关,考虑原因:支气管镜检查对支气管、肺泡的机械性刺激,活检钳和毛刷损伤支气管壁和病灶边缘,同时在在纤支镜活检和刷检后灌洗可起到疏通支气管,促进远端分泌物的排出。用生理盐水在病变部位注入远端气道和肺实质,接触病灶范围较广,负压吸引收集冲洗液较多,细菌量较大,深部的结核菌可能被收集到冲洗液中。肺泡灌洗液对支气管有刺激作用,可以诱发部分患者咳嗽,有利于深部结核菌的排出,获得结核菌的机会增多[7]。另外,PhaB法是通过噬菌体感染结核分枝杆菌,而结核分枝杆菌受一些理化因素作用,表面受体发生细微变化可能导致不能被噬菌体感染[8]。相对痰标本,肺泡灌洗液标本受理化因素影响较小。
总结噬菌体生物扩增法对肺泡灌洗液标本分枝杆菌检测的临床应用。PhaB法操作简便,获取结果快速(2天),相对荧光涂片法有较高的敏感性和特异性。对PhaB法分枝杆菌检测高特异性,临床可以用于结核杆菌和非结核分枝杆菌的菌种鉴定[9]。针对噬菌体必须感染活的结核菌特性,临床中还可以对标本加入不同的结核药,对照不加药标本,筛查结核菌株对不同结核药的耐药性[2]。
参考文献
[1] 马屿,朱莉贞,潘毓萱.结核病[M].北京:人民卫生出版社,2006:103-108.
[2] WLSON SM,ALSUWADIZ,MCNERNEYR,et al Evaluation of an new rapid bacteriophage-base medthod for the drug susceptibility testing of Mycobacterium tuberculosis[J].Natmed,1997,3:465-469.
[3] 彭丽,罗永艾,王国治.噬菌体生物扩增法快速检测结核分枝杆菌标准化研究[J].中华结核和呼吸杂志,2004,27(12):806-810.
[4] ALber H,Heydenrych A,Brookes R,et al Performance of a rapid phage-based test,FAST Plaque TBTM,to diagnose pulmonary tuberculosis from sputum specimens in South Afica[J] ......
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