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编号:12983832
白芨ISSR—PCR反应体系的建立及优化
http://www.100md.com 2016年12月1日 《中国民族民间医药·下半月》2016年第12期
     【摘 要】 目的:对白芨ISSR-PCR反应体系进行建立以及优化。方法:采用正交试验对影响白芨的ISSR-PCR反应体系中的6个影响因素Taq DNA聚合酶、BSA、引物、模板DNA、dNTP、Mg2+进行系统的筛选和优化,寻找白芨ISSR-PCR的最优条件。结果:经过系统的优化后,最终确立了最优的白芨ISSR-PCR方案,50 μL反应液中Taq DNA聚合酶为2.5U、BSA为7.5g/L、引物为5.0μmoL/L、模板DNA为200ng、dNTP为0.4mmoL/L、Mg2+为4.0mmoL/L。结论:试验结果得出最佳的白芨ISSR-PCR反应体系,为后期合理有效的应用ISSR方法对白芨遗传资源的监测提供了参考。

    【关键词】 白芨;ISSR-PCR反应体系;单因素试验;正交试验

    【中图分类号】R284 【文献标志码】 A【文章编号】1007-8517(2016)24-0028-03

    白芨属兰科,其性味甘、苦、涩,微寒,主要归经于肺[1]。白芨现已成为濒临灭绝的珍贵物种,对白芨遗传资源的分类保护已成为人类研究的重大课题之一[2]。ISSR是近年来新兴的一种分子标记技术,在植物遗传资源的保育工作中已得到普及使用[3]。PCR扩增为ISSR的关键技术,主要受到6个因素的影响(Taq DNA聚合酶、BSA、引物、模板DNA、dNTP、Mg2+)[4] ......

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