金铁锁糖基转移酶PtT1的克隆与生物信息学分析(2)
2方法
21引物设计根据金铁锁转录组中糖基转移酶基因序列，设计1对特异性引物PtT1F： AAAAATGAAACACCAAGAAAAGCAG，PtT1R： GATTGAAGAAACCAAAGAAGGGGGC。
22PtT1基因的克隆按照EastepTM总RNA提取试剂盒(普洛麦格)说明书提取金铁锁根中的总RNA；并根据PrimeScriptTMⅡ1st strand cDNA Synthesis Kit(TaKaRa)说明书合成cDNA。以cDNA为模板使用TransStart KD Plus DNA Polymerase(AP301)通过PCR扩增目的片段。表1PCR反应体系
ComponentsVolumeTemplate1 μLForward Primer(10 μM)1 μLReverse Primer(10 μM)1 μL5×TransStart KD Plus Buffer10 μL25 mM dNTPs4 μLTransStart KD Plus DNA Polymerase1 μLddH2Oto 50 μLPCR反应条件：94℃、5min；94℃、30s；45℃、30s ......
您现在查看是摘要页，全文长 3802 字符。
21引物设计根据金铁锁转录组中糖基转移酶基因序列，设计1对特异性引物PtT1F： AAAAATGAAACACCAAGAAAAGCAG，PtT1R： GATTGAAGAAACCAAAGAAGGGGGC。
22PtT1基因的克隆按照EastepTM总RNA提取试剂盒(普洛麦格)说明书提取金铁锁根中的总RNA；并根据PrimeScriptTMⅡ1st strand cDNA Synthesis Kit(TaKaRa)说明书合成cDNA。以cDNA为模板使用TransStart KD Plus DNA Polymerase(AP301)通过PCR扩增目的片段。表1PCR反应体系
ComponentsVolumeTemplate1 μLForward Primer(10 μM)1 μLReverse Primer(10 μM)1 μL5×TransStart KD Plus Buffer10 μL25 mM dNTPs4 μLTransStart KD Plus DNA Polymerase1 μLddH2Oto 50 μLPCR反应条件：94℃、5min；94℃、30s；45℃、30s ......
您现在查看是摘要页，全文长 3802 字符。