天麻普通粉、破壁粉、冻干粉对戊四唑诱导惊厥大鼠海马组织GABA-T mRNA及蛋白表达的影响(3)
2.3.2 对戊四唑诱导惊厥大鼠海马组织样本中GABA-T蛋白表达量的影响 称取适量大鼠海马组织加入适量RIPA(细胞裂解液)裂解液匀浆后,10000 rpm离心20 min,然后取上清液,按BCA 试剂盒测定蛋白浓度。在凝胶电泳槽中加入制备好的蛋白样品,转膜,取膜。封闭液封闭后,使一抗与二抗充分混匀,于室温条件下孵育5 min,加入一步法抗体稀释液(一抗GABA-T浓度(1∶ 1000)、二抗GABA-T浓度(1∶ 200),一抗内参β-actin浓度(1∶ 5000)、二抗内参β-actin浓度(1∶ 200)。混匀,放入PVDF(聚偏氟乙烯)膜,ECL(电致化学发光)化学发光试剂显色,开始曝光。扫描胶片并保存,凝胶成像系统对各组数据进行分析。目的蛋白表达量与同一样本内参表达量之比可以计算出目的蛋白相对表达量。2.4 统计学分析 数据采用SPSS 22.0统计软件统计,用(x±s)表示,采用t检验,P<0.05表示差异有统计学意义。
3 结果
3.1 戊四唑诱导惊厥大鼠海马组织GABA-T mRNA表达量的变化 与正常组比较 ......
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