HPLC法测定中偏康合剂中黄芪甲苷的含量(1)
【摘 要】 目的：建立高效液相色谱法(HPLC)测定中偏康合剂中黄芪甲苷含量的方法。方法：采用 Agilent ZORBAX C18 色谱柱 ( 250mm×4.6mm，5μm) ; 以乙腈：水(32∶ 68)为流动相;流速为1.0mL/min;柱温30℃，ELSD参数：氮气流速为350kpa。结果：黄芪甲苷进样质量在2.177～13.062μg范围内与峰面积呈良好线性关系，r=0.9994，平均回收率为98.2%，RSD为0.95%。结论：该方法准确、快速、简便可靠，结果稳定，可用于中偏康合剂中黄芪甲苷的含量测定。
【关键词】 中偏康合剂;黄芪甲苷;HPLC
【中图分类号】R284.1 【文献标志码】 A 【文章编号】1007-8517(2019)16-0060-03
Abstract：Objective To establish a high performance liquid chromatography (HPLC) method for the determination of astragaloside IV in ZhongPiankang mixture.Methods Agilent ZORBAX C18 column (250mm×4.6mm， 5μm); acetonitrile： water (32∶ 68) as mobile phase; flow rate 1.0mL/min; column temperature 30℃， ELSD parameter： nitrogen flow rate 350 kpa.Results The injection quality of astragaloside IV showed a good linear relationship with the peak area in the range of 2.177～13.062μg， r=0.9994， the average recovery was 98.2%， and the RSD was 0.95%.Conclusion The method is accurate， rapid， simple and reliable， and the results are stable. It can be used for the determination of astragaloside IV in ZhongPiankang mixture mixture.
Keywords：ZhongPiankang Mixture; Astragaloside IV; HPLC
中偏康合劑为云南省曲靖市第一人民医院制剂室研制的制剂，由黄芪、三七、当归等组成，具有补气、活血、化瘀、通络等功效，主要用于气虚络塞、口眼歪斜、语言蹇涩、口角流涎、下肢瘘废、小便频数等症。其中黄芪为君药，首载于《神农本草经》，为豆科植物膜荚黄芪或蒙古黄芪的干燥根，性温，归脾、肺经，具有补气升阳、生津养血、行滞通痹等功效。黄芪甲苷是黄芪的主要活性成分之一，具有抗炎、调节免疫、抗氧化、抗细胞凋亡、调节代谢、抗肿瘤等药理作用[1]。2015版《中国药典(一部)》以黄芪甲苷及毛蕊异黄酮葡萄糖苷的含量作为黄芪质量评价指标[2]。中偏康合剂所含成分复杂，现行版质量标准中仅以薄层色谱法鉴别其中三七、赤芍两种药材，不能完全体现药品的质量。为了更加有效对本药进行质量控制，本实验参照文献[2-7]，以黄芪甲苷为定量指标，采用HPLC-ELSD法进行中偏康合剂中黄芪甲苷含量测定方法，为中偏康质量控制提供参考。
1 仪器与材料
1.1 仪器 LC-2030C 3D高效液相色谱仪(岛津)，ELSD-LTⅡ蒸发光检测器，ME104电子分析天平，ME55电子分析天平。
1.2 材料 黄芪甲苷对照品(批号：110781-201616，纯度为97.4%，中国食品药品检定研究院)，乙腈为色谱纯，水为超纯水，其他为分析纯。
2 方法与结果
2.1 色谱条件Angilent ZORBAX C18色谱柱(4.6mm×250mm，5μm)，流动相为乙腈-水(32：68)，检测器为蒸发光检测器，流速1.0mL·min-1，柱温30℃，氮气流速为350kpa。
2.2 溶液的制备
2.2.1 供试品溶液的制备 取本品25mL，精密量取，置锥形瓶中，精密加入甲醇25mL，称定重量，加热回流1h，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密吸取续滤液25mL，蒸干，残渣加水20mL使溶解，用水饱和的正丁醇振摇提取4次，每次30mL，合并正丁醇液，用氨试液充分洗涤2次，每次30mL，弃去水液，正丁醇液蒸干，残渣加甲醇溶解，转移至10mL量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
2.2.2 对照品溶液的制备 取黄芪甲苷对照品(含量97.4%) 11.1756mg，加甲醇溶解稀释至25mL，制成每1mL含0.4354mg对照品溶液。
2.2.3 阴性样品溶液的制备 按中偏康口服液的处方和制法，制成不含黄芪的药液，再按供试品溶液的制备方法制成阴性对照溶液。
2.3 专属性实验 取2.2项下制备的样品溶液按照2.1的色谱条件分别进样10μL进行测定，结果显示，色谱图在黄芪甲苷对照品相应保留时间处无吸收峰，表明阴性对照无干扰。
2.4 线性关系考察 精密吸取2.2.2黄芪甲苷对照品溶液5μL、10μL、15μL、20μL、25μL、30μL进样，按“2.1”色谱条件下测定，以进样质量的(X)为横坐标，色谱峰面积(Y)为纵坐标进行计算指数，绘制标准曲线，得到标准曲线方程为Y=X1.52644*EXP(9.93932)。相关系数为0.9994。结果表明，黄芪甲苷对照品在2.177～13.062μg范围内，线性关系良好。, http://www.100md.com(邓绍友 袁建平 李玲瑞 杜瑶 李孟林 吕艳)
【关键词】 中偏康合剂;黄芪甲苷;HPLC
【中图分类号】R284.1 【文献标志码】 A 【文章编号】1007-8517(2019)16-0060-03
Abstract：Objective To establish a high performance liquid chromatography (HPLC) method for the determination of astragaloside IV in ZhongPiankang mixture.Methods Agilent ZORBAX C18 column (250mm×4.6mm， 5μm); acetonitrile： water (32∶ 68) as mobile phase; flow rate 1.0mL/min; column temperature 30℃， ELSD parameter： nitrogen flow rate 350 kpa.Results The injection quality of astragaloside IV showed a good linear relationship with the peak area in the range of 2.177～13.062μg， r=0.9994， the average recovery was 98.2%， and the RSD was 0.95%.Conclusion The method is accurate， rapid， simple and reliable， and the results are stable. It can be used for the determination of astragaloside IV in ZhongPiankang mixture mixture.
Keywords：ZhongPiankang Mixture; Astragaloside IV; HPLC
中偏康合劑为云南省曲靖市第一人民医院制剂室研制的制剂，由黄芪、三七、当归等组成，具有补气、活血、化瘀、通络等功效，主要用于气虚络塞、口眼歪斜、语言蹇涩、口角流涎、下肢瘘废、小便频数等症。其中黄芪为君药，首载于《神农本草经》，为豆科植物膜荚黄芪或蒙古黄芪的干燥根，性温，归脾、肺经，具有补气升阳、生津养血、行滞通痹等功效。黄芪甲苷是黄芪的主要活性成分之一，具有抗炎、调节免疫、抗氧化、抗细胞凋亡、调节代谢、抗肿瘤等药理作用[1]。2015版《中国药典(一部)》以黄芪甲苷及毛蕊异黄酮葡萄糖苷的含量作为黄芪质量评价指标[2]。中偏康合剂所含成分复杂，现行版质量标准中仅以薄层色谱法鉴别其中三七、赤芍两种药材，不能完全体现药品的质量。为了更加有效对本药进行质量控制，本实验参照文献[2-7]，以黄芪甲苷为定量指标，采用HPLC-ELSD法进行中偏康合剂中黄芪甲苷含量测定方法，为中偏康质量控制提供参考。
1 仪器与材料
1.1 仪器 LC-2030C 3D高效液相色谱仪(岛津)，ELSD-LTⅡ蒸发光检测器，ME104电子分析天平，ME55电子分析天平。
1.2 材料 黄芪甲苷对照品(批号：110781-201616，纯度为97.4%，中国食品药品检定研究院)，乙腈为色谱纯，水为超纯水，其他为分析纯。
2 方法与结果
2.1 色谱条件Angilent ZORBAX C18色谱柱(4.6mm×250mm，5μm)，流动相为乙腈-水(32：68)，检测器为蒸发光检测器，流速1.0mL·min-1，柱温30℃，氮气流速为350kpa。
2.2 溶液的制备
2.2.1 供试品溶液的制备 取本品25mL，精密量取，置锥形瓶中，精密加入甲醇25mL，称定重量，加热回流1h，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密吸取续滤液25mL，蒸干，残渣加水20mL使溶解，用水饱和的正丁醇振摇提取4次，每次30mL，合并正丁醇液，用氨试液充分洗涤2次，每次30mL，弃去水液，正丁醇液蒸干，残渣加甲醇溶解，转移至10mL量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
2.2.2 对照品溶液的制备 取黄芪甲苷对照品(含量97.4%) 11.1756mg，加甲醇溶解稀释至25mL，制成每1mL含0.4354mg对照品溶液。
2.2.3 阴性样品溶液的制备 按中偏康口服液的处方和制法，制成不含黄芪的药液，再按供试品溶液的制备方法制成阴性对照溶液。
2.3 专属性实验 取2.2项下制备的样品溶液按照2.1的色谱条件分别进样10μL进行测定，结果显示，色谱图在黄芪甲苷对照品相应保留时间处无吸收峰，表明阴性对照无干扰。
2.4 线性关系考察 精密吸取2.2.2黄芪甲苷对照品溶液5μL、10μL、15μL、20μL、25μL、30μL进样，按“2.1”色谱条件下测定，以进样质量的(X)为横坐标，色谱峰面积(Y)为纵坐标进行计算指数，绘制标准曲线，得到标准曲线方程为Y=X1.52644*EXP(9.93932)。相关系数为0.9994。结果表明，黄芪甲苷对照品在2.177～13.062μg范围内，线性关系良好。, http://www.100md.com(邓绍友 袁建平 李玲瑞 杜瑶 李孟林 吕艳)