不同产地干姜中氨基酸成分对比研究(1)
【摘 要】目的：建立检测干姜中氨基酸的高效液相色谱测定法，并比较不同产地干姜中氨基酸的含量。方法：柱前衍生化HPLC，应用色谱柱ELite-AAK;以乙腈-水-4%醋酸钠缓冲液进行梯度洗脱，流速为1.2mL/min，梯度洗脱，检测波长为360nm，柱温为27℃。结果：不同产地干姜均含有所检测的18种氨基酸，其中包括8种人体必需氨基酸。结论：所建立的对干姜的氨基酸成分质量评价具有一定的实际意义，为进一步研究干姜的质量评价提供了有价值的参考。
【关键词】氨基酸;柱前衍生化;HPLC;干姜
【中图分类号】R284.1【文献标志码】A【文章编号】1007-8517(2019)20-0032-04
Abstract：Objective To establish detection of amino acids in dried ginger， high performance liquid chromatographic method， and compare the amino acids content of dry ginger from different. Methods before the column derivatization HPLC， application of chromatographic column ELite - AAK; With acetonitrile - water -4% sodium acetate buffer salt as mobile phase， flow rate of 1.2mL/min， gradient elution， detection wavelength of 360nm， column temperature is 27℃.Results the content of amino acids in dried ginger， has contained the detection of 18 kinds of amino acids， including 8 kinds of essential amino acids.Conclusion the study of amino acid liquid， for the quality evaluation of dried ginger has a certain practical significance.
Keywords：Amino acid; Column derivatization before; HPLC;Dried ginger
姜系姜科植物姜Zingiber officinale Rosc.的根茎，是一种广泛应用的药食两用植物。干姜是姜的干燥品，味辛性热，归脾、胃、肾、心、肺经，温中散寒，回阳通脉，燥湿消痰，主治脘腹冷痛、呕吐泄泻、肢冷脉微、痰饮喘咳[1]。
目前，对干姜中其他类有效成分研究较为广泛，对氨基酸类成分研究较少。氨基酸为人体必需的营养物质，对于它的研究尤为必要。氨基酸是构成蛋白质分子的基本单位，也是构成人体内最基本物质之一。氨基酸在人体内通过代谢可以发挥一些作用，比如合成组织蛋白质转变为碳水化合物和脂肪变成酸、激素、抗体、肌酸等含氨物质氧化成二氧化碳、水和尿素，产生能量。氨基酸在人体中的存在，不仅为合成蛋白质提供了重要原料，而且为促进生长，进行正常代谢、维持生命提供了物质基础[2]。
本实验采用柱前衍生化高效液相色谱法检测干姜中不同氨基酸的含量，并对不同产地的干姜药材中18种氨基酸进行含量测定，以期为干姜药材的质量评价及氨基酸含量研究提供参考。
1 仪器与试药
1.1 仪器 P230II大连依利特氨基酸自动分析仪;UV230II紫外检测器(大连依利特公司);ALC-110.4电子分析天平(北京赛多利斯特仪器系统有限公司);HH-4数显恒温水浴锅(江苏省金坛市荣华仪器制造有限公司);SF-130B高速粉碎仪器机(上海冠联制药装备有限公司);DHG-9070A型电热恒温鼓风干燥箱(上海精宏实验设备有限公司)。
1.2 试药与材料 18种氨基酸对照品(批号：20100108，中国药品生物制品检定所);2，4-二硝基氟苯(大连依利特公司)。乙腈为色谱纯;冰醋酸、N，N-二甲基酰胺为分析纯;水为纯净水。干姜经辽宁中医药大学尹海波教授鉴定符合药典要求。
2 方法与结果
2.1 流动相的配制 A相：乙腈-水(1∶ 1);B相：固体组分B[l1] 4.1g加水950mL，冰醋酸调pH至6.4～6.8，加10mL N，N-二甲基甲酰胺，加水定容至1000mL量瓶中，摇匀后过滤，备用。
2.2 色谱条件[3] 色谱柱：ODS(4.6mm×250mm，5μm，大连依利特);柱温：27℃;检测波长360nm;流速1.2mL/min，梯度洗脱，流动相梯度洗脱曲线见表1。
2.3 衍生缓冲溶液的配制 取衍生缓冲溶液固体组分A[l2]1.24g;固体组分B[l3]7.63g，加水定容至500mL量瓶中，摇匀，备用。
2.4 平衡缓冲溶液的配制 取平衡缓冲溶液固体组分A[l4] 0.91;固体组分B[l5] 3.58g，加水定容至250mL量瓶中，搖匀，备用。
2.5 对照品溶液的制备 氨基酸对照品适量(丙氨酸5.1mg、组氨酸5.0mg、脯氨酸4.9mg、精氨酸5.3mg、亮氨酸5.6mg、丝氨酸4.8mg、天门冬氨酸5.3mg、异亮氨酸4.8mg、苏氨酸5.0mg、半胱氨酸5.0mg、赖氨酸5.0mg、色氨酸5.1mg、谷氨酸5.0mg、蛋氨酸4.9mg、缬氨酸4.9mg、甘氨酸4.9mg、苯丙氨酸5.6mg、酪氨酸2.7mg)，精密称取，加衍生缓冲溶液定容至25mL容量瓶中，精密吸取1mL，加衍生缓冲溶液定容至10mL容量瓶中，备用。, 百拇医药(张美慧 李瑞海)
【关键词】氨基酸;柱前衍生化;HPLC;干姜
【中图分类号】R284.1【文献标志码】A【文章编号】1007-8517(2019)20-0032-04
Abstract：Objective To establish detection of amino acids in dried ginger， high performance liquid chromatographic method， and compare the amino acids content of dry ginger from different. Methods before the column derivatization HPLC， application of chromatographic column ELite - AAK; With acetonitrile - water -4% sodium acetate buffer salt as mobile phase， flow rate of 1.2mL/min， gradient elution， detection wavelength of 360nm， column temperature is 27℃.Results the content of amino acids in dried ginger， has contained the detection of 18 kinds of amino acids， including 8 kinds of essential amino acids.Conclusion the study of amino acid liquid， for the quality evaluation of dried ginger has a certain practical significance.
Keywords：Amino acid; Column derivatization before; HPLC;Dried ginger
姜系姜科植物姜Zingiber officinale Rosc.的根茎，是一种广泛应用的药食两用植物。干姜是姜的干燥品，味辛性热，归脾、胃、肾、心、肺经，温中散寒，回阳通脉，燥湿消痰，主治脘腹冷痛、呕吐泄泻、肢冷脉微、痰饮喘咳[1]。
目前，对干姜中其他类有效成分研究较为广泛，对氨基酸类成分研究较少。氨基酸为人体必需的营养物质，对于它的研究尤为必要。氨基酸是构成蛋白质分子的基本单位，也是构成人体内最基本物质之一。氨基酸在人体内通过代谢可以发挥一些作用，比如合成组织蛋白质转变为碳水化合物和脂肪变成酸、激素、抗体、肌酸等含氨物质氧化成二氧化碳、水和尿素，产生能量。氨基酸在人体中的存在，不仅为合成蛋白质提供了重要原料，而且为促进生长，进行正常代谢、维持生命提供了物质基础[2]。
本实验采用柱前衍生化高效液相色谱法检测干姜中不同氨基酸的含量，并对不同产地的干姜药材中18种氨基酸进行含量测定，以期为干姜药材的质量评价及氨基酸含量研究提供参考。
1 仪器与试药
1.1 仪器 P230II大连依利特氨基酸自动分析仪;UV230II紫外检测器(大连依利特公司);ALC-110.4电子分析天平(北京赛多利斯特仪器系统有限公司);HH-4数显恒温水浴锅(江苏省金坛市荣华仪器制造有限公司);SF-130B高速粉碎仪器机(上海冠联制药装备有限公司);DHG-9070A型电热恒温鼓风干燥箱(上海精宏实验设备有限公司)。
1.2 试药与材料 18种氨基酸对照品(批号：20100108，中国药品生物制品检定所);2，4-二硝基氟苯(大连依利特公司)。乙腈为色谱纯;冰醋酸、N，N-二甲基酰胺为分析纯;水为纯净水。干姜经辽宁中医药大学尹海波教授鉴定符合药典要求。
2 方法与结果
2.1 流动相的配制 A相：乙腈-水(1∶ 1);B相：固体组分B[l1] 4.1g加水950mL，冰醋酸调pH至6.4～6.8，加10mL N，N-二甲基甲酰胺，加水定容至1000mL量瓶中，摇匀后过滤，备用。
2.2 色谱条件[3] 色谱柱：ODS(4.6mm×250mm，5μm，大连依利特);柱温：27℃;检测波长360nm;流速1.2mL/min，梯度洗脱，流动相梯度洗脱曲线见表1。
2.3 衍生缓冲溶液的配制 取衍生缓冲溶液固体组分A[l2]1.24g;固体组分B[l3]7.63g，加水定容至500mL量瓶中，摇匀，备用。
2.4 平衡缓冲溶液的配制 取平衡缓冲溶液固体组分A[l4] 0.91;固体组分B[l5] 3.58g，加水定容至250mL量瓶中，搖匀，备用。
2.5 对照品溶液的制备 氨基酸对照品适量(丙氨酸5.1mg、组氨酸5.0mg、脯氨酸4.9mg、精氨酸5.3mg、亮氨酸5.6mg、丝氨酸4.8mg、天门冬氨酸5.3mg、异亮氨酸4.8mg、苏氨酸5.0mg、半胱氨酸5.0mg、赖氨酸5.0mg、色氨酸5.1mg、谷氨酸5.0mg、蛋氨酸4.9mg、缬氨酸4.9mg、甘氨酸4.9mg、苯丙氨酸5.6mg、酪氨酸2.7mg)，精密称取，加衍生缓冲溶液定容至25mL容量瓶中，精密吸取1mL，加衍生缓冲溶液定容至10mL容量瓶中，备用。, 百拇医药(张美慧 李瑞海)