HPLC法测定抗癌胶囊中华蟾酥毒基、脂蟾毒配基含量
[摘 要]：目的：建立抗癌胶囊中华蟾酥毒基、脂蟾毒配基含量的测定方法。方法：采用高效液相色谱法，色谱柱为Kromasil 5um C18柱(4.6mm×250mm，5um)，流动相为0.5%磷酸二氢钾溶液-L腈(50:50) (用磷酸调pH值为3.2)，流速为1.0ml·mim-1，检测波长为296nm。结果：华蟾酥毒基进样量在0.0342～0.228μg的范围内与峰面积呈良好的线性关系，相关系数为0.9998；脂蟾毒配基进样量在0.081～0.540μg的范围内与峰面积也呈良好的线性关系，相关系数为0.9999。平均回收率分别为98.54%、98.76%；RSD分别为0.52%，0.60%，结论：本方法简便快速，分离良好，结果准确可靠。
[关键词]：抗癌胶囊 华蟾酥毒基 脂蟾毒配基 高效液相色谱法
抗癌胶囊为本院制剂中心移植产品，由干蟾皮、蝎子等五味中药组成。具有解毒，消肿，止痛的功效，用于中、晚期肿瘤，慢性乙型肝炎等症。方中君药干蟾皮主要含有蟾酥毒、羚基华蟾毒配基、胆甾烯酯等成分。其中华蟾酥毒基、脂蟾毒配基既为疗效成分又为毒性成分，必须对其等成分进行限量控制。对于华蟾酥毒基、脂蟾毒配基的含量测定研究，近年来主要有分光光度法、薄层扫描法和高效液相色谱法，参考药典中蟾酥药材的含量测定方法，最终采用高效液相色谱法建立了适合本制剂和含量测定方法。该法灵敏、专属、简便、重现行良好。
, 百拇医药
1 仪器与试药
1.1 仪器 高效液相色谱仪(美国Waters公司，配Wa-ters600泵，Waters2487双波长检测器)，Millennium32色谱工作站。
1.2 试药 抗癌胶囊三批样品为自制，批号为060218、060222、060226华蟾酥毒基、脂蟾毒配基(中国药品生物制品鉴定所，批号分别为：110803-200504、110718-200507)。磷酸二氢钾(西安化学试剂厂)，乙腈为色谱纯，水为重蒸馏水，其余试剂均为分析纯。
2 方法与结果
2.1 色谱条件与系统适用性试验色谱柱为Kromasil ODS C18(5um，4.6min×250mm)；流动相：0.5%磷酸二氢钾溶液-L腈(50:50)(用磷酸调pH值为3.2)；
, 百拇医药
检测波长：296nm；柱温：室温；流速：1ml/min。在此条件下，样品中华蟾酥毒基、脂蟾毒配基与其它组分均能达到基线分离，而缺干蟾皮的空白对照不产生干扰，
2.2 对照品溶液制备 精密称取经五氧化二磷减压干燥24小时的华蟾酥毒基对照品5mg及脂蟾毒配基对照品1mg，分别配50ml量瓶中，加甲醇溶液并稀释至刻度，摇均；分别精密量取5ml，各置10ml,量瓶中，加甲醇至刻度，摇均，作为对照品溶液。
2.3 供试品溶液制备 取本品内容物3.0g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加甲醇20ml，称定重量，加热回流1小时，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇均，过0.45um 滤膜，取续滤液，作为供试品溶液。
2.4 线性范围 分别精密吸取华蟾酥毒基、脂蟾毒配基对照品溶液3、5、10、15、20μl，按上述色谱条件，注入液相色谱仪，记录峰面积，分别以华蟾酥毒基、脂蟾毒配基面积对进样量(μg)回归，得华蟾酥毒基回归方程A：809718.56C-413.09，脂蟾毒配基回归方程，A=737111.83C+4368.70，相关系数分别为0.9998、0.9999，华蟾酥毒基0.0342～0.228μg之间、脂蟾毒配基在0.081～0.54μg之间线性范围良好。
, http://www.100md.com
2.5 精密度试验 精密吸取供试品溶液(批号：060218)15μl，连续进样5次，华蟾酥毒基与脂蟾毒配基RSD分别为0.99%、0.84%。
2.6 重复性试验 按拟定的含量测定方法，对同一批号样品(批号：060218)分别制成供试品溶液，测得峰面积并计算，华蟾酥毒基含量分别为：19.85，20.27，20.36，19.20，19.87μg/粒，平均含量为19.9μg/粒，RSD为2.30%。脂蟾毒配基含量分别为：89.45，87.31，88.42，86.46，85.90μg/粒，平均含量为87.51μg粒，RSD为1.65%。
2.7 稳定性试验 取样试品(批号：060218)，按供试品制备方法制备样品，分别于Oh、4h、8h，进样15μl，结果表明样品中华蟾酥毒基与脂蟾毒配基峰值在8h内稳定，RSD分别为0.09%、0.34%。
2.8 回收率试验 采用加样回收法，取已知含量的于蟾皮复方制剂，分别精密加入华蟾酥毒基、脂蟾毒配基对照品溶液，按供试品制备方法操作，同样色谱条件测定，计算回收率，平均回收率分别为98.54%,98.76%；RSD分别为0.52%,0.60%。结果表明，本方法回收率良好。
, 百拇医药
2.9 样品测定 取三批供试品，按前述色谱条件测定，结果三批样品华蟾酥毒基与脂蟾毒配基总量分别为108.01，107.63,121.63μg/粒，经过三批含量测定结果及整个含量测定研究过程，考虑到药材的含量及其它影响因素，暂定本品含于蟾皮以华蟾酥毒基(C26H34O6。)和脂蟾毒配基(C24H32O4)的总量计，应为80～150μg。
3 讨论
本品在测定时，选择流动相0.5%磷酸二氢钾溶液-乙腈(50:50) (用磷酸调pH值为3.2)分离效果良好，而且精密度、重现性、回收率均良好，故以此法建立了本品的质量标准，从而有效保证本品质量。, 百拇医药(郑 瑞 窦群立)
[关键词]：抗癌胶囊 华蟾酥毒基 脂蟾毒配基 高效液相色谱法
抗癌胶囊为本院制剂中心移植产品，由干蟾皮、蝎子等五味中药组成。具有解毒，消肿，止痛的功效，用于中、晚期肿瘤，慢性乙型肝炎等症。方中君药干蟾皮主要含有蟾酥毒、羚基华蟾毒配基、胆甾烯酯等成分。其中华蟾酥毒基、脂蟾毒配基既为疗效成分又为毒性成分，必须对其等成分进行限量控制。对于华蟾酥毒基、脂蟾毒配基的含量测定研究，近年来主要有分光光度法、薄层扫描法和高效液相色谱法，参考药典中蟾酥药材的含量测定方法，最终采用高效液相色谱法建立了适合本制剂和含量测定方法。该法灵敏、专属、简便、重现行良好。
, 百拇医药
1 仪器与试药
1.1 仪器 高效液相色谱仪(美国Waters公司，配Wa-ters600泵，Waters2487双波长检测器)，Millennium32色谱工作站。
1.2 试药 抗癌胶囊三批样品为自制，批号为060218、060222、060226华蟾酥毒基、脂蟾毒配基(中国药品生物制品鉴定所，批号分别为：110803-200504、110718-200507)。磷酸二氢钾(西安化学试剂厂)，乙腈为色谱纯，水为重蒸馏水，其余试剂均为分析纯。
2 方法与结果
2.1 色谱条件与系统适用性试验色谱柱为Kromasil ODS C18(5um，4.6min×250mm)；流动相：0.5%磷酸二氢钾溶液-L腈(50:50)(用磷酸调pH值为3.2)；
, 百拇医药
检测波长：296nm；柱温：室温；流速：1ml/min。在此条件下，样品中华蟾酥毒基、脂蟾毒配基与其它组分均能达到基线分离，而缺干蟾皮的空白对照不产生干扰，
2.2 对照品溶液制备 精密称取经五氧化二磷减压干燥24小时的华蟾酥毒基对照品5mg及脂蟾毒配基对照品1mg，分别配50ml量瓶中，加甲醇溶液并稀释至刻度，摇均；分别精密量取5ml，各置10ml,量瓶中，加甲醇至刻度，摇均，作为对照品溶液。
2.3 供试品溶液制备 取本品内容物3.0g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加甲醇20ml，称定重量，加热回流1小时，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇均，过0.45um 滤膜，取续滤液，作为供试品溶液。
2.4 线性范围 分别精密吸取华蟾酥毒基、脂蟾毒配基对照品溶液3、5、10、15、20μl，按上述色谱条件，注入液相色谱仪，记录峰面积，分别以华蟾酥毒基、脂蟾毒配基面积对进样量(μg)回归，得华蟾酥毒基回归方程A：809718.56C-413.09，脂蟾毒配基回归方程，A=737111.83C+4368.70，相关系数分别为0.9998、0.9999，华蟾酥毒基0.0342～0.228μg之间、脂蟾毒配基在0.081～0.54μg之间线性范围良好。
, http://www.100md.com
2.5 精密度试验 精密吸取供试品溶液(批号：060218)15μl，连续进样5次，华蟾酥毒基与脂蟾毒配基RSD分别为0.99%、0.84%。
2.6 重复性试验 按拟定的含量测定方法，对同一批号样品(批号：060218)分别制成供试品溶液，测得峰面积并计算，华蟾酥毒基含量分别为：19.85，20.27，20.36，19.20，19.87μg/粒，平均含量为19.9μg/粒，RSD为2.30%。脂蟾毒配基含量分别为：89.45，87.31，88.42，86.46，85.90μg/粒，平均含量为87.51μg粒，RSD为1.65%。
2.7 稳定性试验 取样试品(批号：060218)，按供试品制备方法制备样品，分别于Oh、4h、8h，进样15μl，结果表明样品中华蟾酥毒基与脂蟾毒配基峰值在8h内稳定，RSD分别为0.09%、0.34%。
2.8 回收率试验 采用加样回收法，取已知含量的于蟾皮复方制剂，分别精密加入华蟾酥毒基、脂蟾毒配基对照品溶液，按供试品制备方法操作，同样色谱条件测定，计算回收率，平均回收率分别为98.54%,98.76%；RSD分别为0.52%,0.60%。结果表明，本方法回收率良好。
, 百拇医药
2.9 样品测定 取三批供试品，按前述色谱条件测定，结果三批样品华蟾酥毒基与脂蟾毒配基总量分别为108.01，107.63,121.63μg/粒，经过三批含量测定结果及整个含量测定研究过程，考虑到药材的含量及其它影响因素，暂定本品含于蟾皮以华蟾酥毒基(C26H34O6。)和脂蟾毒配基(C24H32O4)的总量计，应为80～150μg。
3 讨论
本品在测定时，选择流动相0.5%磷酸二氢钾溶液-乙腈(50:50) (用磷酸调pH值为3.2)分离效果良好，而且精密度、重现性、回收率均良好，故以此法建立了本品的质量标准，从而有效保证本品质量。, 百拇医药(郑 瑞 窦群立)
参见：首页 > 中医药 > 中药专业 > 中草药汇编 > 中药大典 > 动物类 > 蟾酥