竹荪子实体多糖的提取及化学组成
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【摘要】 从天然竹荪中经脱脂、采用20、40、60、80℃四个不同温度热水梯度抽提、Sevage 法脱蛋白、乙醇沉淀得到四种粗竹荪多糖。对其中在60℃下提取的多糖进行研究。经测定此多糖具有较高的粘度，再对其用丙酮进行分级得到纯度较高的竹荪多糖-3。用气相色谱对其单糖组成结构进行分析，结果表明荪多糖-3是一种以葡萄糖为主的多糖，通过刚果红实验证实此多糖可能具有三螺旋结构。
【关键词】竹荪多糖; 分离; 纯化;结构表征;链刚性
【中图分类号】R284.1【文献标识码】A【文章编号】1007-8517(2009)08-0008-01
Study of the polysaccharide from the body of dictyophora duicata
WANG jiatang, HU Zhun
(Wuhan university of technology ，Hubei，Wuhan,China，430000)
【Abstract】 we obtained a new polysaccharide from the dictyophora duicata fisch extraction by hot water at 20、40、60、80℃. The polysaccharide was investgated by GC,viscosity and Congo red, it was indicated that it was content by the glucan.Its it is rare and indicating that it has a well-organized helical conformation in aqueous solution.
【Keywords】polysaccharides; isolation; purification;characterization; polymer chain
竹荪(Dictyophora duplicata)是一种担子菌，隶属真菌门(Eumycota)、担子菌亚门(Basidiomycotina).野生竹荪分布主要在于中国贵州、云南、四川和浙江等省区竹林下的腐殖土上。竹荪目前已经可以大规模人工种植。近年来的研究发现，竹荪含有多种氨基酸、维生素、多糖和多种无机盐等[1～3]。除其营养价值外，同时还具有一定的防病保健作用。多糖是竹荪子实体中重要组成成分之一，多糖生理活性和功能已有许多报道[4～5]。林玉满，连宾等对竹荪多糖都有研究，得到的多糖都是由多种单糖组成的杂多糖，本文作者采用热水萃取、有机溶剂沉淀和丙酮分级等方法，从竹荪子实体中分离得到竹荪多糖，气相色谱方法，确定了该多糖是由单一的葡萄糖组成，为深入研究竹荪多糖的化学结构和生物活性提供依据。
1材料与方法
1.1材料与仪器
1.1.1材料与耗材实验用竹荪选用湖北省阳新县人工栽培的竹荪子实体(干品)为多糖提取材料，95%医用酒精，各种单糖标样为sigma试剂厂产品，其余试剂均为分析纯、化学纯或生化试剂。
1.1.2仪器与设备Aglient 6890N气相色谱仪，气相色谱仪(GC)配备HP-5 毛细管柱(30m×0.25mm，0.25μm，5% phenyl methyl-siloxane)，FID 检测器，U-3010 Sdetrophotometer 型紫外分光光度计(日本日立公司) 。
1.2方法
1.2.1竹荪多糖的提取、分离和纯化竹荪子实体烘干切碎后称量，然后按照料液质量体积比为1：6的比例加入分析纯乙酸乙酯，95%乙醇用索氏提取器中回流提取6小时,再用用水为提取溶剂，在室温下用水浸泡过夜后，后分别在20、40、60、80℃下，子实体和水之比为1∶5提取竹荪多糖，浸提时间3～5h，共提取3次，合并3次浸提液。取60℃提取的多糖进行处理，真空减压浓缩，浓缩一倍体积。在浓缩液中加入4倍体积的乙醇(95%)搅拌，沉淀为多糖和蛋白质的混合物，此为粗多糖。上述粗多糖经Sevage法(氯仿∶异戊醇=3∶1混合摇匀)脱游离蛋白，进行粗多糖纯化。粗多糖溶液加入Sevage试剂后，恒温振荡充分，使蛋白质充分沉淀，离心(8000r/min)分离，去除蛋白质。脱游离蛋白后，经H2O2脱色。溶液经乙醇沉淀，离心，得干燥沉淀，再经水溶解后，冷冻干燥即得较为纯化的竹荪多糖。对得到的多糖用丙酮进行分级，得到纯度较高多糖竹荪多糖-3。
1.2.2紫外分析在280nm和260nm处测定紫外吸收度检测脱蛋白率。
1.2.3粘度测定测定多糖溶液的粘度数据，进行相关的数据处理，采用外推法计算出特性粘度。恒温槽温度设置25.0℃,以水做为溶剂,用粘度计分别测出溶剂、多糖溶液流出的时间，根据公式：
1.2.4单糖组分分析气相色谱分析: 称取20mg竹荪多糖, 放入具塞试管中, 加入2N硫酸溶液5mL后, 封管, 在105℃水解8h, 水解液加少量蒸馏水, 用BaCO3中和后离心除沉淀, 上清液冷冻干燥, 得到固体糖样。称取10mg固体糖样、10mg盐酸羟和7mg内标，加入0.5mL吡啶，放入90℃水浴中加热反应30分钟并振荡。取出后冷至室温，加入0.5mL醋酸酐，在90℃下继续反应30分钟进行乙酰化，反应产物可直接进行气相色谱分析。
气相色谱分析条：高纯氮作载气，柱流量1ml/min。程序升温：柱初温140℃，以7℃/min 升至240℃，恒定10分钟。进样口温度为250℃，检测器温度为270℃。氢气35ml/min，空气350ml/min，氮器气30ml/min。
1.2.5刚果红实验取0.5mg多糖样品，加入2.0ml蒸馏水和2.0ml80μmol/L刚果红试剂，逐渐加入NaOH溶液，使NaOH的浓度由0逐渐升到0.5mol/L,并用紫外可见分光分析仪进行全扫描，测得在各NaOH浓度条件下的最大吸收波长，以NaOH为横坐标最大吸收波长为纵坐标作图。以不加糖样品的刚果红溶液作为空白。
2结果与讨论
2.1紫外光谱(UV) 分析紫外光谱显示, 竹荪多糖在260nm , 280nm 处均无明显吸收, 说明该多糖不含核酸及蛋白质 ......
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