史慧星,陈 云,游庆朋,杨 磊,袁 红

    宫颈癌是女性常见恶性肿瘤,宫颈癌的发生与发展是多因素多阶段演变的结果,多种癌基因及抑癌基因参与了癌变过程。今后的目标是在力争早期诊断的同时,在分子生物学基础上确定宫颈癌发生及发展的始动环节,采用针对性的靶向治疗。Wnt信号传导通路是一种对控制胚胎发育有重要作用、进化上保守的信号传导通路,其决定细胞的分化和增生。研究表明 Wnt信号传导通路不恰当的激活参与了多种人类肿瘤的发生和发展。Wnt通路致癌的关键是 β-连环蛋白 (β-catenin)降解障碍致使胞质内游离的 β-catenin聚集并与 Tcf/lef结合进入细胞核,激活下游靶基因细胞周期蛋白 D1(cyclinD1)的转录,导致肿瘤的发生。Wnt信号通路途径的改变在大肠癌发生中的作用已较明确,在其他恶性肿瘤中的改变也显示出重要意义,深入了解该途径的特点及其在宫颈癌中的变化对于宫颈癌的早期诊断、预后判断及靶向治疗研究具有重要的意义。本研究应用免疫组织化学方法检测正常宫颈鳞状上皮组织、宫颈上皮内瘤样病变 (cervical intraepithelial neoplasia,CIN)、宫颈鳞癌组织中 β-catenin与 cyclinD1的表达情况,分析其表达率的变化,探讨其在 Wnt信号通路中对宫颈鳞癌发生、发展的作用。

    1 对象与方法

    1.1 研究对象 标本来源于 2007年 4月—2008年 12月河北省邢台市人民医院及邢台矿业集团总医院病理科宫颈癌手术和活检的存档蜡块。患者术前均未行放疗或化疗。宫颈鳞状细胞癌 42例 (宫颈癌组),按组织学分级:Ⅰ级 8例;Ⅱ级 22例;Ⅲ级 12例。其中有淋巴结转移者 10例,无淋巴结转移者 32例。患者年龄 31～68岁,平均 48.9岁。CIN 20例 (CIN组,其中 CINⅡ级 9例,CINⅢ级 11例)。同时取正常宫颈组织 8例作为正常对照组。

    1.2 试验材料 β-catenin鼠抗人单克隆抗体为 ZYMED公司产品。CyclinD1兔抗人多克隆抗体为 Labvision公司产品。羊抗鼠二步法通用型试剂盒。羊抗兔二步法通用型试剂盒。EDTA抗原修复液。封闭用正常山羊血清工作液。显色底物:3,3-二氨基联苯胺 (DAB)。以上试剂均购自北京中山生物技术有限公司。

    1.3 方法 (1)采用 β-catenin免疫组织化学染色:二甲苯脱蜡 10 min×2,梯度乙醇入水 (100%×1,90%×1,80%×1)各 10 min,PBS缓冲液 5 min×1,在 3%甲醇 -过氧化氢混合液室温 15 min,灭活内源性过氧化物酶,PBS缓冲液 5 min×3,EDTA抗原修复液,微波炉高火 2.5 min,解冻档 10 min,室温冷却 30 min,PBS缓冲液 5 min×3,10%山羊血清封闭,湿盒内室温 30 min,β-cat鼠抗人单克隆抗体 (工作液 1:100),湿盒内 4℃过夜,PBS缓冲液 5 min×3,羊抗鼠二步法工作液湿盒内室温 30 min,PBS缓冲液 5 min×3,DAB显色液,组织显色后用自来水中止反应,Mayer氏苏木精染液20 s,自来水冲洗,乙醇脱水 (80%×1、90%×1、100%×1)各 10 min,二甲苯透明,中性树脂封片 ......