邓守恒，吴亚玲，柯贤柱，陈 萍，李 芳，石小燕

    子宫内膜癌占女性生殖道恶性肿瘤的20%～30%，其发病率逐年上升。Lax等[1]将内膜癌按发病机制分为两型:Ⅰ型与雌激素相关，占85%;Ⅱ型与雌激素无关，占15%。其中I型最常见的分子水平改变为:人10号染色体上缺失的磷酸酶和张力蛋白基因 (PTEN)突变缺失及k-RAS基因突变等[2]。已知子宫内膜癌的发生、发展与一些信号通路的活性改变密切相关，其中主要包括表皮生长因子受体 (EGFR)和雷帕霉素靶蛋白 (mTOR)两条通路。当前，抑制相关信号通路已成为肿瘤靶向治疗的热点，故本研究拟以PTEN呈不同表达状态的两株子宫内膜癌细胞株 (PTEN缺失的Ishikawa细胞和PTEN表达完整的HEC-1A细胞)为研究对象，采用 EGFR及mTOR两条信号通路抑制剂进行干预，观察两株子宫内膜癌细胞的生物学行为改变，探讨不同PTEN状态下两条信号通路在子宫内膜癌发生、发展中的可能作用，为进一步明确发病机制，合理选择抗肿瘤药物提供新的依据。

    1 材料与方法

    1.1 药品试剂和仪器 表皮生长因子 (EGF)、甲基纤维素(CPS4000)、碘化丙锭 (PI)为Sigma产品;EGFR抑制剂RG-14620(RG)、mTOR抑制剂雷帕霉素 (RA)购自美国Biomol公司;DMEM培养基购自美国GIBCO公司;Transwell小室购自美国Costar公司;BMP型倒置相差显微镜购自日本OLYMPUS公司;Epics Elite ESP型流式细胞仪购自美国Coulter公司。

    1.2 方法

    1.2.1 细胞培养及分组 两株子宫内膜癌细胞株 (Ishikawa和HEC-1A)由本院临床医学研究所提供，培养于含10%小牛血清的DMEM培养基内，于37℃、饱和湿度，5%CO2条件下培养。两株细胞分别经EGF预处理2 h，并分别给予10 μmol/L RG、10μmol/L RA、10μmol/L RG+10μmol/L RA，另设空白对照细胞 (未给予任何信号通路抑制剂)，倒置显微镜下观察拍照。

    1.2.2 细胞克隆法检测细胞增殖 参照文献[3]配制半固体培养基，收集经不同抑制剂处理24 h后的各组细胞，PBS洗去药物，离心1 000 r/min×3 min，用含20%小牛血清的培养液稀释为7.0×103个/ml单细胞悬液，于24孔板预加1.2%甲基纤维素培养基1.0 ml/孔，加入单细胞悬液50μl，使每孔细胞数为350个，每个浓度设4个复孔，混匀后置37℃、5%CO2培养箱中孵育12～14 d后于倒置显微镜下计数细胞克隆数 ......