卢博奇，蔺 莉

    宫颈癌是妇科疾病中最常见的恶性肿瘤之一，每年有近30万新发宫颈癌病例，总体5年生存率约为52%。发达国家如美国每年约有1万例宫颈癌新发病例，而中国每年约有8～10万例宫颈癌新发病例，死亡率位居中国女性癌症的第二位[1]。宫颈癌近年来呈现年轻化趋势，其发病机制尚不明确，但很多研究证明99%的宫颈癌组织中可检出人乳头瘤病毒(HPV)。目前普遍接受的观点是:HPV是宫颈癌的主要致病因子[2-3]。然而在感染 HPV的妇女中，大多数可自行消退，仅少数妇女发展为持续性感染并进展为宫颈上皮内瘤样变(CIN)甚至宫颈癌。但宫颈癌患者并非都有HPV的感染，说明在宫颈癌的发生过程中，还有其他一些因素发挥作用[4]。人半翼 (hWAPL)基因是近年来发现的与宫颈癌及HPV关系十分密切的一个基因[5-6]，研究表明hWAPL基因在宫颈癌中特异性高表达[6]。本研究在分子水平上采用实时荧光定量聚合酶链反应 (PCR)测定宫颈中hWAPL基因的表达水平，探讨hWAPL基因表达与宫颈病变之间的关系，为探索宫颈癌的早期诊断方法提供理论依据。

    1 资料和方法

    1.1 研究对象 收集2007年3月—2009年1月首都医科大学附属北京友谊医院门诊行阴道镜检查、取材并经病理检查证实的宫颈病变标本共100例，患者均未经任何物理、化学、放射治疗及手术治疗，包括慢性宫颈炎、CINⅠ、CINⅡ、CINⅢ、宫颈癌各20例。病理结果均由北京友谊医院病理科证实。阴道镜下取材的宫颈组织先保存于液氮中，后转移至-80℃冰箱保存。

    1.2 试验步骤

    1.2.1 总RNA提取 每个样本取冻存组织50～100 mg，使用总RNA提取试剂盒〔天根生化科技 (北京)有限公司〕，用离心柱法进行总RNA提取。将RNA在1%琼脂糖中进行电泳检测其完整性，可见28S及18S两条清晰条带。

    1.2.2 逆转录合成cDNA

    1.2.2.1 引物设计及合成 根据Gene bank中hWAPL基因及β-actin基因 (看家基因)序列 ......