敖 翔，唐爱国，罗昔波，皮兰敢，章 清

    近年来，铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa，PA)对人致病作用明显增强，成为一系列严重化脓性感染尤其是支气管扩张、慢性支气管炎、囊性肺纤维化等疾病继发感染的重要致病菌[1-2]。随着抗菌药物的广泛应用，细菌的耐药性越来越严重且有明显的上升趋势，给临床治疗造成了极大困难[3]。目前为止，研究者们发现的PA耐药原因有以下几个方面：外膜的通透性降低，外排蛋白D2缺失[3]，药物的主动外排系统作用[4-9]，β-内酰胺酶、氨基糖苷钝化酶的产生，靶位的改变以及细菌生物被膜的形成。本研究通过在PA菌液中加入硅纳米颗粒并进行培养，观察硅纳米颗粒是否能进入并存留在PA内，旨在探讨PA主动外排泵对PA摄入硅纳米颗粒的影响，为将其作为药物载体提供实验依据。

    1 材料与方法

    1.1 标本来源 收集中南大学湘雅二医院2007年1—6月检测的PA临床菌株24株，分别编号为S1～S24，均采用Micro Scan Walk Away 96微生物鉴定系统进行鉴定。PA01为PA的野生菌株，作为MexA基因的阳性对照，来自西北大学中科院分子微生物实验室；ATCC27853为PA的标准菌株，购自卫生部临床检验中心，符合美国临床和实验室标准化研究所(CLSI)抗微生物药物敏感性试验标准。硅纳米颗粒为自制，制作方法参照文献[10]。

    1.2 主要试剂及仪器 细菌总RNA抽提试剂Trizol购自Invitrogen Life Technologies公司；TaKaRa dNTPs TaqTM及缓冲系统、6xloading buffer及DNA marker(O′GeneRuler 100bp Ladder Plus)均为晶美生物有限公司产品；引物序列参照文献[11]，由上海生工生物公司合成，Trizol试剂购自Invitrogen公司。QIAGEN One Step RT-PCR Kit购自QIAGEN公司 ......