王 新，锦见俊雄

    他汀类药物是限制胆固醇生物合成的3-羟基-3-甲基戊二酰辅酶A(3-hydroxy-3-methylglutaryl coenzyme A，HMG-CoA)还原酶的特殊抑制剂。大量临床干预试验表明将他汀类药物作为一级和二级预防治疗后，可以极大地改善冠心病的治疗效果[1]。此外，研究还表明他汀类药物可以降低心力衰竭的发病率[2]。尽管他汀类药物对诱发的动脉粥样硬化的改善与降低血清中胆固醇水平有关，最近的研究表明其对血管壁有直接影响——抑制血管平滑肌细胞增殖并改变体外血管内皮细胞的动脉粥样化形成有关的基因表达[3]。但是，他汀类药物对肥大心肌细胞直接作用的机制尚不明确。本实验的目的是确定瑞舒伐他汀[4]是否对体外内皮素1诱发的肥大心肌细胞有直接抑制作用，并研究瑞舒伐他汀影响肥大心肌细胞的机制。

    1 材料与方法

    1.1 实验动物与材料 新生Wistar大鼠(1～2 d)从SLC(日本静冈县)采购。瑞舒伐他汀和普伐他汀分别由鲁南制药集团股份有限公司与三共理化学株式会社无偿提供。甲羟戊酸、角鲨烯、法尼基-焦磷酸(FPP)及牛儿-焦磷酸(GGPP)从美国Sigma公司采购。肉毒杆菌C3胞外酶和Y27632 〔(R)-(+)-反式-氮-(4-吡啶基)-4-(1-氨乙基)-环己甲酰胺·2盐酸〕从Calbiochem公司采购，[14C]苯丙氨酸(phenylalanine, Phe)从Amersham生命科学公司采购。内皮素1从肽研究所(日本大阪)采购。甲羟戊酸、角鲨烯、FPP、GGPP、C3胞外酶、Y27632及内皮素1溶解在杜氏培养基(DMEM)中。

    1.2 心肌细胞培养 新生大鼠心肌细胞在之前报道方法[5]的基础上加以改动[6]富集培养。分离心房、心室，将心室肌细胞分散在含有0.06%胶原酶Ⅱ(Worthington生物化学公司，纽约弗利霍德)的平衡盐溶液中，37 ℃下搅拌6 min，然后用移液管转移约20次。使用断续Percoll梯度法进行心肌细胞分化。使用纯化的心肌细胞进行实验，心肌细胞加入内皮素1(0、10-7mol/L)分别制备正常心肌细胞和肥大心肌细胞，培养24 h，取心肌细胞加入瑞舒伐他汀〔0(对照组)、10-9、10-8、10-7、10-6mol/L〕和普伐他汀〔0(对照组)、10-9、10-8、10-7、10-6mol/L〕培养24 h。

    1.3 [14C]Phe结合率检测 不同浓度药物处理心肌细胞24 h后，向培养基中送气，并在-80 ℃下贮存。培养基(0.5 μl)使用醋酸酸化 ......