刘丹丹，隋汝波，张 磊，夏海苗，王春检

    卒中后抑郁 (post-stroke depression，PSD)是卒中后常见精神并发症之一，可发生于卒中后的各个时期，严重影响患者的生活质量和愈后[1-3]。目前该病发病机制不明，多种机制并存。近年来越来越多的证据表明小脑与认知、行为及精神疾病相关[4-7]。同时，临床试验已证实电刺激小脑顶核能显著改善PSD患者的抑郁症状[8]。小脑可通过广泛的神经通路与其他部位脑组织发生联系是不同精神疾病发生的病理基础，目前国内外关于PSD小脑的研究多集中在影像学方面，本课题组之前的研究发现小脑低功能与PSD发病相关，于是本实验在前期研究的基础上观察PSD大鼠小脑形态学改变，并观察小脑浦肯野细胞凋亡情况，为明确PSD发病机制及PSD的临床治疗提供新的方向。

    1 材料与方法

    1.1 材料

    1.1.1 实验动物 健康雄性SD大鼠72只，均经旷野实验 (OFT)评分排除水平运动得分及垂直运动得分总和低于20分及超过120分的大鼠。体质量为250～350 g(由辽宁医学院实验动物中心提供)。许可证号:SCXK(辽)。实验动物级别:普通级。

    1.1.2 实验试剂 兔抗大鼠激活型半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(activated-caspase 3)抗体 (北京博奥森生物技术有限公司);链霉亲和素-生物素复合物 (SABC)试剂盒及二氨基联苯胺 (DAB)试剂盒 (北京中杉金桥生物技术有限公司);TUNEL试剂盒 (罗氏公司)。

    1.1.3 主要仪器 LEICA-RM2135石蜡切片机，烘片机，烤片机，恒温水浴箱，BH/CH20BIMF200显微镜，CTAS-1000细胞图像分析仪。

    1.2 方法

    1.2.1 动物分组及实验方法 将实验大鼠适应饲养1周，昼夜节律光照，自由摄食进水，通风良好， (21±2)℃恒温。将大鼠随机分为4组:假手术组 (6只)给予假手术处理，除拴线不插入颈总动脉外，余同卒中组;抑郁组 (6只)给予慢性不可预见的温和刺激(CUMS)结合孤养;余60只大鼠行大脑中动脉闭塞(MCAO)术，术后随机取神经功能评分处于1～4分的大鼠12只，随机分为卒中组 (6只)和PSD组 (6只)，PSD组大鼠于MCAO术后第3天给予CUMS结合孤养。

    1.2.2 动物模型制备方法

    1.2.2.1 大鼠 CUMS 模型 参照 Willner等[9]和 Katz等[10]方法:(1)禁食、禁水20 h;(2)禁水17 h;(3)倾斜鼠笼45℃17 h;(4)持续光照17 h;(5)湿笼(100 g锯屑+200 ml水)21 h;(6)4℃游5 min;(7)水平摇晃5 min;(8)行为限制2 h;(9)夹尾1 min ......