高宗强，郭 雄，陈君长，段 琛，马玮娟，刘瑞宇，顾其胜

    大骨节病是一种慢性变形性、地方性的骨关节病，严重危害了病区人群的健康，目前其发病原因及机制尚不清楚[1]，其与骨关节炎具有相似的临床症状、体征及关节软骨病理学变化，尚无有效的促进软骨修复的方法。尽管在最新美国骨科医师学会(AAOS)骨关节炎指南中，对骨关节炎患者关节腔注射透明质酸不予推荐，但在既往临床中，大量病例证实膝关节腔注射透明质酸钠可有效缓解大骨节病、骨关节炎的症状与体征[2-7]。关节炎患者关节液中，透明质酸含量下降，分子量减小，但软骨细胞自身合成、分泌透明质酸的能力有无变化，相关研究较少。补充外源性透明质酸，对软骨细胞自身合成、分泌透明质酸又有何影响，目前亦无相关研究。本课题选择在透明质酸合成酶中至关重要的合成酶2基因作为软骨细胞透明质酸合成能力的观测指标,将大骨节病和骨关节炎软骨细胞和正常软骨细胞比较，观察病理状态下软骨细胞透明质酸合成酶2(HAS2)mRNA表达有何变化，并观察外源性透明质酸干预对软骨细胞自身透明质酸合成的影响。

    1 资料与方法

    1.1 临床资料 选取2006年8月—2008年7月陕西地方病研究所明确诊断大骨节病，并实施膝关节游离体摘除术后取出的游离体及关节软骨6例为大骨节病组，其中男3例，女3例；年龄35～47岁；西安市红十字会医院明确诊断骨关节炎，并行全膝关节置换术后的膝关节软骨6例为骨关节炎组，其中男3例，女3例；年龄57～73岁。符合我国大骨节病临床诊断标准(GB16003-1995)[8-9]和美国风湿病协会骨关节炎诊断标准(1995年版)[10]诊断大骨节病和骨关节炎。另选择同时期由于车祸等意外原因截肢或身亡者的新鲜膝关节软骨6例为对照组，其中男4例，女2例；年龄27～39岁；取材部位与大骨节病、骨关节炎患者一致，均排除了类风湿性关节炎等其他关节疾患。

    1.2 主要试剂与仪器 DMEM/F12培养液(Hyclone公司，美国)；小牛血清(兰州明海生物制品有限公司)；胰蛋白酶、透明质酸酶、Ⅱ型胶原酶、MTT、 DMSO(SIGMA公司，美国)；AnnexinⅤ-PI染液(深圳晶美生物工程有限公司)；透明质酸钠(上海其胜生物制剂有限公司)；Shel-Lable CO2培养箱(Shel-Lable公司，美国)；倒置显微镜(Olympus公司，日本)；Nikon双目光学显微镜及纤维照相系统(日立公司，日本)；RNAfast200-总RNA 极速抽提试剂盒(上海飞捷生物技术有限公司)；cDNA反转录试剂盒(MBI公司 ......