丁 妍，王小玲，邓会岩，苏丽宏，张 培，刘月平

    ·论著·

    蟾蜍灵抑制Raf/MEK/细胞外信号调节激酶信号通路活化影响人食管鳞癌细胞增殖及迁移机制研究

    丁 妍，王小玲，邓会岩，苏丽宏，张 培，刘月平

    目的 探讨蟾蜍灵通过抑制人食管鳞癌细胞Raf/MEK/细胞外信号调节激酶(ERK)信号通路的活化从而影响人食管鳞癌细胞增殖及迁移的作用机制。方法 培养人食管鳞癌细胞株TE13，分为对照组、不同浓度蟾蜍灵组(蟾蜍灵10 nmol/L组、蟾蜍灵25 nmol/L组、蟾蜍灵50 nmol/L组、蟾蜍灵100 nmol/L组)、UO126组和蟾蜍灵100 nmol/L+UO126组，采用Western blotting方法和免疫细胞化学方法分别检测各组Raf-1、磷酸化Raf-1(p-Raf-1)、MEK、磷酸化MEK(p-MEK)、ERK、磷酸化细胞外信号调节激酶(p-ERK)表达量和阳性表达率。划痕实验和Boyden小室实验检测各组细胞的迁移距离和穿过滤膜的细胞数量。结果 蟾蜍灵25 nmol/L组、蟾蜍灵50 nmol/L组和蟾蜍灵100 nmol/L组p-Raf-1、p-ERK表达量低于对照组(P1 材料与方法

    1.1 材料

    1.1.1 细胞 人食管鳞癌细胞株TE13由河北医科大学第四医院科研中心提供。

    1.1.2 主要试剂 RPMI 1640培养液(美国Gibco公司)；胎牛血清(杭州四季青生物工程材料有限公司)；蟾蜍灵、UO126(MEK/ERK磷酸化抑制剂)(上海源叶生物科技有限公司)；BCA法蛋白含量测定试剂盒(北京索莱宝生物科技有限公司)；兔抗Raf-1多克隆抗体(美国SANTACRUZ公司)；兔抗磷酸化Raf-1(p-Raf-1)多克隆抗体(美国SANTACRUZ公司)；兔抗 MEK1/2多克隆抗体(美国 SAB 公司)；兔抗磷酸化MEK1/2(p-MEK1/2)多克隆抗体(美国 SAB 公司)；兔抗人ERK多克隆抗体(美国SANTACRUZ公司)；小鼠抗人磷酸化细胞外信号调节激酶(p-ERK)单克隆抗体(美国SANTACRUZ公司)；通用型二抗(北京中杉金桥生物技术有限公司)；二氨基联苯胺(DAB)显色试剂盒(北京中杉金桥生物技术有限公司)。

    1.2 方法

    1.2.1 分组 人食管鳞癌细胞株TE13分为对照组、不同浓度蟾蜍灵组(蟾蜍灵10 nmol/L组、蟾蜍灵25 nmol/L组、蟾蜍灵50 nmol/L组、蟾蜍灵100 nmol/L组)、UO126组和蟾蜍灵100 nmol/L+UO126组 ......